[发明专利]一种新的基因克隆方法有效
| 申请号： | 201610357602.1 | 申请日： | 2016-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN106047912B | 公开（公告）日： | 2020-01-10 |
| 发明（设计）人： | 王超 | 申请（专利权）人： | 北京克隆欧科科技有限责任公司 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66 |
| 代理公司： | 11244 北京市合德专利事务所 | 代理人： | 王文会;刘榜美 |
| 地址： | 100081 北京市海淀区中关*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种基因克隆技术，通过在基因克隆过程中引入固定接头来一次性组装载体基本元件和目的基因，并用这些固定接头作为分子标记设计通用pcr引物进行筛选和测序，同时用特异于这些通用的固定接头的抗体进行目的基因表达检测。该固定接头为在不同克隆实验都能通用的序列固定的DNA接头（同时也是做克隆连接的DNA接头），然后利用这个固定克隆接头所编码的寡肽为通用的检测标记。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基因 克隆 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于分子生物学中基因克隆的方法，所述的方法包括如下描述：(ⅰ)设计带有固定接头，特异于目的基因和载体基本元件的PCR引物，所述固定接头的长度介于10-35核苷酸，其组成在核苷酸A、G、C和T中任意选择并进行排列组合，且固定接头包含有特定的切口酶酶切位点，固定接头一旦设计完成，在随后的不同批次实验中不需再改变其DNA序列；(ⅱ)根据固定接头来进行载体基本元件的构建、组合、选择并和相应目的基因组合成所需要的克隆载体；(ⅲ)固定接头参与了基因克隆的全过程，并与目的基因一起，进行了蛋白表达，(iv)根据固定接头，用相应的特异于固定接头的PCR引物进行克隆PCR筛选；(v)根据固定接头所编码的寡肽，酶抗原生产特异的抗体，此抗体通用于检测所有通过此方法克隆的目的基因的表达。/n
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