[发明专利]一种澳洲坚果花药诱导愈伤组织的方法

摘要

本发明公开了一种澳洲坚果花药诱导愈伤组织的方法，该方法首先以澳洲坚果为供试材料，采集花蕾期为27～29 d的花蕾放入冰箱中冷藏一定时间后，用水冲洗处理后的花蕾，转入超净工作台，经酒精消毒、升汞浸泡、无菌水冲洗后放在灭菌滤纸上吸干表面水份后备用；然后，用接种针剥开花蕾上的萼片，纵向切开花蕾，去掉花丝，取出花药接于愈伤组织诱导培养基中暗培养；最后将得到的愈伤组织转入增殖培养基中增殖。通过本发明的方法获得的花药愈伤组织多、再分化力强，为澳洲坚果遗传转化、新品种选育及种苗繁育奠定基础。

主权项

1.一种澳洲坚果花药诱导愈伤组织的方法，其特征在于包括以下步骤：1）以澳洲坚果为供试材料，采集花蕾期为27～29 d的花蕾放入4℃冰箱中冷藏备用；2）用水冲洗步骤1）中花蕾，转入超净工作台，放入已灭菌的空培养瓶中，经酒精消毒、升汞浸泡、无菌水冲洗，然后放在灭过菌的滤纸上吸干表面水分 备用；3）待步骤2）处理完成后，用接种针剥开花蕾萼片，纵向切开花蕾，去除花丝，取出花药放在愈伤组织诱导培养基中暗培养；4）将步骤3）中获得的愈伤组织接种于增殖培养基中增殖；步骤3）中的愈伤组织诱导培养基为MS +2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 2.0 mg/L +蔗糖70g/L +琼脂7.0 g/L，pH5.8；步骤4）中的愈伤组织增殖培养基为MS +ZT 0.05 mg/L +NAA 0.01 mg/L +IBA 0.05mg/L +蔗糖30 g/L+琼脂7.0 g/L，pH5.8。