[发明专利]一种哈茨木霉菌菌株抗菌肽的制备方法及在防治月季黑斑病中的应用

摘要

本发明一种哈茨木霉菌抗菌肽的制备方法，将1×10⁶CFU/mL哈茨木霉菌孢子悬液接种于液体培养基中，哈茨木霉菌菌株选自菌株编号为CGMCC 3.5488、CGMCC3.6635、或者CGMCC 3.5492中的任意一种；置于摇床中培养48~96h；将菌液转移至发酵罐中，发酵培养6~8天；将发酵液过滤后，以甲醇‑水作流动相，采用大孔吸附树脂柱进行粗分离，然后将粗分离产物以甲醇做流动相经葡聚糖凝胶柱纯化，纯化产物进行冷冻干燥得到哈茨木霉菌抗菌肽。还提供了采用上述制备的哈茨木霉菌抗菌肽粉剂在防治月季黑斑病中的应用。本发明制备的哈茨木霉菌抗菌肽纯度高，对月季黑斑病有很高对防治效果。

主权项

一种哈茨木霉菌抗菌肽的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1)将1×10⁶CFU/mL哈茨木霉菌孢子悬液接种于液体培养基中，所述的哈茨木霉菌菌株来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心，选自菌株编号为CGMCC 3.5488、CGMCC3.6635、或者CGMCC 3.5492中的任意一种，所述的哈茨木霉菌孢子悬液和液体培养基的体积比为1ml: 80~120ml；所述的液体培养基由水、土豆和葡萄糖组成，每升液体培养基中，所述的土豆为 180~220 g，所述的葡萄糖为18~22 g，余量为水，置于25~30℃、150~200r/min的摇床中培养48~96h；2)将菌液转移至发酵罐中，于25~30℃、搅拌速率 150~200r/min的条件下发酵培养 6~8天，所述的发酵培养基由土豆、蔗糖、葡萄糖、无水乙酸钠、七水硫酸镁、蛋白胨 、氯化锰、消泡剂和水组成，上述物质的浓度为：土豆200 g/L，蔗糖10 g/L，葡萄糖 10 g/L，无水乙酸钠1.66 g/L，七水硫酸镁 5. 29 g/L，蛋白胨 0. 5 g/L，氯化锰 0. 15 g/L，消泡剂0.05 g/L，余量为水；3)将步骤2）的发酵液过滤后，以甲醇‑水作流动相，采用大孔吸附树脂柱进行粗分离，然后将粗分离产物以甲醇做流动相经葡聚糖凝胶柱纯化，纯化产物进行冷冻干燥得到哈茨木霉菌抗菌肽。