[发明专利]一种肺癌基因的检测方法及应用

摘要

本申请公开了一种肺癌基因的检测方法及应用。本申请的检测方法，包括对cfDNA进行文库构建，并采用针对肺癌相关的105个基因设计的12659条探针对cfDNA文库进行杂交捕获，上机测序，对测序结果进行数据分析，获得全面、准确的肺癌基因信息。本申请的检测方法，只需少量外周血即可进行，真正实现了无创检测。本申请的检测方法针对ctDNA中的肺癌重要基因进行捕获测序分析，在肺癌早期进行筛查，针对肺癌患者提供用药相关基因突变信息，为肺癌早期诊断、个体化精准用药指导、药效评估以及预后动态监测提供了重要的参考依据。

主权项

1.一种非诊断治疗目的的肺癌基因的检测方法，其特征在于：对cfDNA进行文库构建，并采用针对肺癌相关的105个基因设计的12659条探针对cfDNA文库进行杂交捕获，上机测序，对测序结果进行数据分析，获得全面、准确的肺癌基因信息；所述肺癌相关的105个基因包括，17个肺癌靶向药物靶点基因、18个肺癌化疗药物靶点基因、8个肺癌耐药基因、49个肺癌信号通路相关基因，以及13个DNA修复相关的基因；所述对cfDNA进行文库构建，具体包括，提取外周血中的cfDNA，并对提取的cfDNA进行质量控制，测定其片段大小和浓度，依序对提取的cfDNA进行双链末端修复、样品纯化、3’末端加T、连接接头、PCR扩增富集，最后对所述PCR扩增富集的产物进行PCR产物纯化即获得cfDNA文库；在进行测序之前还包括对捕获产物进行PCR扩增，然后采用PCR扩增产物进行测序，所述PCR扩增的循环数根据捕获区域的大小而定，具体的，捕获区域为1‑499kb，循环数为12‑14个循环，捕获区域大于499kb，并小于或等于1.49Mb，循环数为9‑11，捕获区域大于1.49Mb，循环数为8‑10；所述接头为Seq ID No.1所示序列；Seq ID No.1：5’‑P‑ACTGNNNNNNNNNNNNAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCACXXXXXXTAGAGCATACGGCAGAAGACGAACUAATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT‑3’。