[发明专利]一种桑园土壤氨氧化细菌的高效分离与鉴定方法

摘要

本发明公开了一种桑园土壤氨氧化细菌的高效分离与鉴定方法，包括以下步骤：氨氧化细菌的富集；分离纯化氨氧细菌；分离微生物的鉴定。本发明利用氨氧化细菌较喜欢偏碱性生长环境的特性，将富集培养液的pH值调到8.5，同时将分离培养液的pH值调到8.0，此方法能从桑园土壤中富集培养到10类氨氧化细菌，极大的提高了富集效率，并采用Biolog微生物鉴定系统对其进行快速鉴定，为桑园土壤氨氧化细菌的利用奠定了基础。

主权项

一种桑园土壤氨氧化细菌的高效分离与鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、氨氧化细菌的富集：取1.0g新鲜桑园土壤样品，加入装有富集培养液的试管中，在28℃恒温培养箱中培养14天，吸取培养液5滴于白瓷板穴中，依次加入格利斯试剂A液、B液1或2滴，如有亚硝酸:NO₂^‑存在，则呈红色，表示有亚硝化细菌存在；如果检测到红色，向该管中添加1mL的营养补充液，继续培养，每隔3～4天用格利斯试剂检测一次，当检测的培养液为深红色时，吸取1mL的培养液至新鲜富集培养液中再培养，至检测液为深红色，此为高度富集的氨氧化细菌培养液；步骤2、分离纯化氨氧细菌：取100mL步骤1所述二次富集至检测为深红色的培养液，将其涂布到分离培养基平板上，28℃培养1‑2周以上，同时不断观察菌落生长情况，然后挑取圆形无色透明，略显黄色的单菌落划线至BUG鉴定培养基上培养；步骤3、分离微生物的鉴定：用接种环挑取在鉴定培养基上划线分离的单菌落，至鉴定培养液IF‑A管壁上，用接种环将菌打散，然后将其与鉴定液混合，至比浊计上，使其混度在90～95％之间，然后将接种液用排枪接到鉴定培养板上，根据每个菌的生长速度，在28℃培养箱中培养1～7天，然后采用Biology Microststion微生物鉴定系统进行快速鉴定，鉴定分离到的氨氧化细菌包括Pseudomonas，Arthrobacter，Ochrobactrum，Roseomonas，Enterobacter，Gordonia，Delftia，Pseudoxanthomonas，Mycobacterium，Stenotrophomonas。