[发明专利]一种基于双抗及细胞密度的高特异性高纯度的肿瘤细胞分选方法在审
| 申请号： | 201610366839.6 | 申请日： | 2016-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN105950558A | 公开（公告）日： | 2016-09-21 |
| 发明（设计）人： | 赵兴中;黄琴琴;蔡博 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12N5/09 | 分类号： | C12N5/09 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 常海涛 |
| 地址： | 430072 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于双抗及细胞密度的高特异性高纯度的肿瘤细胞分选方法，该方法包括如下步骤：在粒径为30‑100µm、密度为1.16‑3g/mL的羟基微球表面化学键合上一层20‑100nm厚的明胶，得到包裹明胶的羟基微球；在包裹明胶的羟基微球表面修饰上抗体anti‑EpCAM和anti‑CD146；将病人血样与修饰抗体的羟基微球混匀孵育得混合样品，滴加到1.15‑1.20g/mL细胞分离液的上层，离心分离后，捕获住肿瘤细胞的微球沉积在细胞分离液底部；将捕获住肿瘤细胞的微球使用明胶酶降解微球表面明胶，释放肿瘤细胞。本发明分选效率及纯度更高，并且分选出来的肿瘤细胞能够被释放及培养。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 细胞 密度 特异性 纯度 肿瘤 分选 方法 | ||
【主权项】：
一种基于双抗及细胞密度的高特异性高纯度的肿瘤细胞分选方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)配制密度为1.15‑1.20g/mL的细胞分离液；所述的细胞分离液包括Ficoll或Percoll细胞分离液；(2)在粒径为30‑100μm、密度为1.16‑3g/mL的羟基微球表面化学键合上一层20‑100nm厚的明胶，得到包裹明胶的羟基微球；所述的羟基微球包括二氧化硅微球、聚甲基丙烯酸甲酯微球；(3)在包裹明胶的羟基微球表面修饰上抗体anti‑EpCAM和anti‑CD146，得到双抗体修饰的羟基微球；(4)将病人血样与双抗体修饰的羟基微球混匀孵育得混合样品，将混合样品滴加到1.15‑1.20g/mL细胞分离液的上层，离心分离后，捕获住肿瘤细胞的微球沉积在细胞分离液底部；(5)将收集的捕获住肿瘤细胞的微球使用明胶酶降解微球表面明胶，释放肿瘤细胞。
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