[发明专利]表达AA9家族多糖单加氧酶基因TLAA9‑3的毕赤酵母工程菌株

摘要

本发明涉及一种表达AA9家族多糖单加氧酶基因TLAA9‑3的毕赤酵母工程菌株；通过RT‑PCR方法从疏绵状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus获得糖苷水解酶基因TLAA9‑3，将其克隆并插入到毕赤酵母整合表达载体pPICZαA中，然后将得到的糖苷水解酶基因TLAA9‑3表达载体pPICZαA/TLAA9‑3导入到毕赤酵母GS115中，再从中筛选出一种表达糖苷水解酶基因TLAA9‑3的酵母工程菌GS‑CT‑9‑1。该工程菌表达的糖苷水解酶TLAA9‑3对内切纤维素酶的活性具有明显的促进作用，混合酶比原始内切酶N24的降解纤维素的活性提高1.25倍。TLAA9‑3具有良好的热稳定性和提高纤维素酶活力的能力，可广泛用于纤维废料及其它工业领域，具有重大经济价值和社会价值。

主权项

一种表达疏绵状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosusAA9家族多糖单加氧酶基因TLAA9‑3的酵母工程菌株，其特征在于该菌为一种毕赤酵母，通过RT‑PCR方法从疏绵状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus获得热稳定AA9家族糖苷水解酶基因TLAA9‑3,将该基因克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZαA,获得表达重组质粒pPICZαA/TLAA9‑3,转化毕赤酵母GS115,从中筛选出表达热稳定多糖单加氧酶基因TLAA9‑3的毕赤酵母工程菌株GS‑CT‑9‑3，该糖苷水解酶TLAA9‑3对内切纤维素酶的活性具有明显的促进作用，并且能够将磷酸膨胀纤维素氧化裂解为纤维寡糖，飞行质谱结果鉴定氧化裂解裂解纤维素长链主既有C1氧化也有C4氧化。