[发明专利]一种桑树根际高效解无机磷细菌的培养方法

摘要

本发明公开了一种桑树根际高效解无机磷细菌的培养方法，该方法在相同条件下培养，将3株高效解无机磷细菌培养至稳定期后，测定菌体的生长量和菌株的解磷能力，从而筛选出最适pH值为6.0‑7.5，最适装液量范围为100‑125mL。该优化条件的获得为高效解磷微生物的应用提供技术支撑。

主权项

一种桑树根际高效解无机磷细菌的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：高效解磷微生物的分离：从不同施肥桑树根际土壤中分离到3株高效解无机磷细菌W1、W2、W3；步骤2：高效解无机磷细菌生长曲线的测定：3株供试菌株在牛肉膏蛋白胨琼脂平板培养基上28℃培养24h，挑取一环接种于30mL灭菌肉膏蛋白胨液体培养基中，于28℃150r/min摇床上培养12h，制备成1×10⁸cfu/mL悬浮菌液；在250mL的三角瓶中装入100mL的磷酸三钙无机磷培养基，灭菌冷却后；每瓶分别接种1mL 1 108cfu/mL解无机磷细菌悬浮菌液，3次重复，于28℃150r/min摇床上培养，定时取样，利用比浊法测定菌体生长量，绘制生长曲线；步骤3：碳源、氮源的筛选：以葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、甘露醇为碳源，以酵母粉、牛肉膏、尿素、NH₄NO₃、(NH₂)SO₄为氮源，在相同的条件下，将3株高效解无机磷细菌培养至稳定期后，测定菌体的生长量和菌株的解磷能力，从而筛选出最适碳源和氮源种类；步骤4：最佳pH值筛选：使用pH计调节磷酸三钙无机磷培养基的pH值为5.0～8.5，以0.5为梯度设置8个pH值点，在相同的条件下，将3株高效解无机磷细菌培养至稳定期后，测定菌体的生长量和菌株的解磷能力，从而筛选出最适pH值范围；步骤5：最佳装液量的确定：在250mL三角瓶中，分别装入25mL、50mL、75mL、100mL、125mL、150mL、175mL、200mL的磷酸三钙无机磷培养基，在相同的条件下，将3株高效解无机磷细菌培养至稳定期后，测定菌体的生长量和菌株的解磷能力，从而筛选出最适装液量范围。