[发明专利]一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法有效
| 申请号： | 201610367604.9 | 申请日： | 2016-05-27 |
| 公开（公告）号： | CN105884906B | 公开（公告）日： | 2021-11-19 |
| 发明（设计）人： | 叶学君;吴思恒;余燕;郜富权;兰万军;陈静山;张桂涛 | 申请（专利权）人： | 广州太力生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/22;C07K1/18 |
| 代理公司： | 广州市越秀区哲力专利商标事务所(普通合伙) 44288 | 代理人： | 唐超文;贺红星 |
| 地址： | 511400 广东省广州市南沙区珠江街*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，包括如下步骤：(1)通过培养CHO工程细胞获得rhEPO‑Fc融合蛋白的细胞培养液；(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后采用Mabselect SuRe亲和层析进行纯化；(3)将步骤(2)粗纯化得到的rhEPO‑Fc融合蛋白液采用Capto adhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO‑Fc融合蛋白液。本发明通过Mabselect SuRe‑Capto adhere两步纯化工艺纯化rhEPO‑Fc融合蛋白，得到高纯度的rhEPO‑Fc，样品经临床前药理毒理学研究，其半衰期比EPO延长了近5倍，而且安全、有效。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 长效 红细胞 生成 融合 蛋白 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)利用基因工程手段，将裂解活性最弱的人IgG2的Fc片段基因连接到人促红细胞生成素(hEPO)基因的3＇端，利用脂质体将含有hEPO‑Fc重组基因的质粒转染CHO细胞；该CHO细胞经培养，在培养液中分泌表达rhEPO‑Fc融合蛋白；CHO细胞培养生产工艺是：一次扩增培养，共收获四次含rhEPO‑Fc融合蛋白无血清培养液；(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后，采用Mabselect SuRe亲和层析进行纯化，然后用0.5mol/L Na2HPO4调整蛋白溶液的pH到中性，得到粗纯化的rhEPO‑Fc融合蛋白液；重复步骤(2)四次；(3)将四次通过步骤(2)得到的粗纯化rhEPO‑Fc融合蛋白液混合后采用Capto adhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO‑Fc融合蛋白液。
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