[发明专利]伏康树中化合物的制备方法和用途

摘要

本发明公开了伏康树中化合物的制备方法，包括以下步骤：取伏康树树皮，乙酸乙酯渗漉提取，减压干燥渗漉液得浸膏，柱层析，用石油醚‑乙酸乙酯洗脱，收集各段液体，继续分离纯化即得。该方法可以有效从伏康树中提取制备出多种化合物。本发明还公开了这些化合物的抗肿瘤用途，具有广阔的市场前景。

主权项

1.一种制备化合物的方法，其特征在于：所述化合物如为下述化合物中的任一种或多种：其中，Me表示甲基；包括以下步骤：取伏康树树皮，乙酸乙酯渗漉提取，减压干燥渗漉液得浸膏，柱层析，用石油醚‑乙酸乙酯洗脱，收集各段液体，继续分离纯化即得；其中，所述化合物12、13、14、15的制备方法的步骤如下：A、取伏康树树皮，干燥，打粉，用14倍量乙酸乙酯渗漉提取，减压干燥渗漉液得浸膏；B、运用硅胶柱层析石油醚：乙酸乙酯＝5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,1:2,0:1，甲醇洗脱，并运用TLC点板合并为8段，分别为Fr.1‑8；C1：化合物12的制备：第1段Fr.1采用0.3mol/L HCl溶解和NaOH沉淀，再通过甲醇重结晶得到化合物12；C2：化合物13的制备：第2段Fr.2运用硅胶柱层析石油醚：丙酮＝6:1,5:1,4:1,3:1,2:1,1:1洗脱，划分为6段，即Fr.2‑1到Fr.2‑6，Fr.2‑6重结晶得到化合物13；C3：化合物14和化合物15的制备：第3段Fr.3运用凝胶Sephadex LH‑20,柱直径1cm，柱高160cm，流动相为氯仿：甲醇体积比为1:1，4个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第35‑50个流份为化合物14，合并第60‑75个流份为化合物15，氯仿：甲醇＝1:1纯化得到化合物14和化合物15；其中，所述化合物1‑9的制备方法的步骤如下：(1)伏康树树皮干燥得药材，粉碎，14倍药材量乙酸乙酯渗滤提取，提取液浓缩得浸膏；(2)分离：采用硅胶柱层析，流动相为：石油醚‑乙酸乙酯＝5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，1:2，0:1，甲醇，梯度洗脱，按流动相合并为几个部位；运用TLC根据斑点显色情况将剩余样品合并为Ⅰ、Ⅱ和甲醇部位；(3‑1)Ⅰ部位经MCI柱洗脱，柱体积314mL，流动相为甲醇：水体积比为40:60，3倍柱体积；50:50，3倍柱体积；60：40，3倍柱体积；80:20，3倍柱体积；100:0，3倍柱体积；梯度洗脱，每50mL收集一个流份，结合TLC点板划段；(3‑1‑1)化合物1的制备：合并第1‑10个流份经Rp‑8反相硅胶柱，柱体积56mL，流动相为甲醇：水体积比为15:85，3倍柱体积；20:80，3倍柱体积；25:75，3倍柱体积；30:70，3倍柱体积；35:65，3倍柱体积；梯度洗脱，每10mL收集一个流份，结合TLC点板划段；合并第50‑67个流份经Sephadex LH‑20柱洗脱，柱体积125mL，流动相为甲醇：水体积比为100:0，8个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第150‑154个流份硫酸乙醇显紫色单一斑点，油状物化合物为化合物1；(3‑2)Ⅱ部位用甲醇溶解，抽滤，滤液直接上MCI柱，经90％甲醇等度洗脱液作为样品；90％甲醇洗脱的样品运用硅胶柱层析，柱直径4cm，柱高20cm，流动相为石油醚：乙酸乙酯体积比为10:1，4倍柱体积；8:1，4倍柱体积；5:1，4倍柱体积；3:1，4倍柱体积；1:1，4倍柱体积；1:2，4倍柱体积；乙酸乙酯，4倍柱体积；甲醇，4倍柱体积；梯度洗脱；运用TLC点板分别合并每个梯度划分为8段FrⅡ.1‑8；(3‑2‑1)化合物2和化合物3的制备：FrⅡ.1在50℃水浴温度下滴加甲醇，边滴加边振荡直至不再溶解，趁热过滤，滤液放置常温下有白色沉淀物析出，析出沉淀经凝胶Sephadex LH‑20柱，柱体积125mL，流动相为氯仿：甲醇体积比为3:2，5个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合点板合并第84‑107个流份，再经Rp‑8反相硅胶柱，柱直径2cm，柱高18cm，流动相为甲醇：水体积比为40:60，8倍柱体积；50:50，8倍柱体积；55:45，8倍柱体积；100:0，8倍柱体积；梯度洗脱，每10mL收集一个流份，结合TLC点板划段；合并第35‑43个流份为化合物2；合并第49‑161个流份为化合物3；(3‑2‑2)化合物4的制备：FrⅡ.5运用半制备HPLC，YMC‑Pack ODS‑A半制备高效液相色谱柱，250mm×10mm,S‑5μm,12nm；流动相：65％甲醇/氨水；流速：4ml/min；检测波长：205nm；tR＝15min；纯化得化合物4；(3‑3)甲醇部位样品，采用硅胶柱层析，柱直径6cm，柱高20cm，流动相为氯仿：甲醇体积比为30:1，6倍柱体积；25:1，6倍柱体积；20:1，6倍柱体积；15:1，6倍柱体积；梯度洗脱，结合点板合并得到4个与流动相相应部位，30:1部位经Rp‑8反相硅胶柱，柱直径3cm，柱高18cm，流动相为甲醇：水体积比为30:70，5倍柱体积；60:40，6倍柱体积；90:10，5倍柱体积；梯度洗脱，分别合并各梯度项下洗脱液，得到30％部位，60％部位，90％部位；60％部位运用制备HPLC[LC‑10ATVP系统，紫外‑可见检测器，流动相甲醇/水：0‑8min 60％，8‑20min 60‑100％，20‑25min 100％，25‑28min 100‑60％，28‑30min 60％；流速：10ml/min；检测波长：205nm；划分为3段Fr.1‑Fr.3；(3‑3‑1)化合物5和化合物6的制备：Fr.1运用半制备HPLC，YMC‑Pack ODS‑A半制备高效液相色谱柱，250mm×10mm,S‑5μm,12nm；流动相：65％甲醇/水等度；流速：1ml/min；检测波长：205nm；纯化，得到化合物5和化合物6；(3‑3‑2)化合物7：Fr.2运用半制备HPLC，YMC‑Pack ODS‑A半制备高效液相色谱柱，250mm×10mm,S‑5μm,12nm，流动相：40％甲醇/水等度；流速：1ml/min；检测波长：205nm；纯化，得到化合物7；(3‑3‑3)化合物8和化合物9的制备：Fr.3运用Sephadex LH‑20凝胶柱，柱直径1cm，柱高160cm，流动相为甲醇：水体积比为100:0，4个柱体积；等度洗脱，流速为7S/滴，每5mL收集一个流份，结合TLC点板合并第45‑50个流份得到化合物8；合并第60‑70个流份得到化合物9。