[发明专利]一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法

摘要

本发明公开了一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，包括原料选取、枸杞提取液的制备、菊花提取液的制备、晶状体细胞培养液的制备、晶状体细胞的培养，与现有技术相比，本发明采用不同配比枸杞菊花提取液培养晶状体细胞，提高细胞增殖能力，减少氧化应激，降低细胞凋亡的细胞培养方法，可用于指导养肝明目用药的理论基础，具有推广应用的价值。

主权项

一种枸杞菊花提取液培养晶状体上皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：原料选取：取宁夏枸杞10克，杭白菊5克；步骤二：枸杞提取液的制备：选取无蛀虫、无霉变的枸杞干果为原料，清洗晾干后，将每粒枸杞干果破碎成两瓣，并置于加热的容器(70℃‑90℃)内，之后向加热的容器中加入枸杞干果，重量10倍的水(100ml)进行静置浸泡5‑8小时，然后，加热煮沸至容器内水的体积减少一半，之后停止加热，过滤除渣，得到枸杞提取液，备用；步骤三：菊花提取液的制备：选取菊花原材料，除去杂质后，放入清水中进行振荡清洗3‑5min，捞出淋干后，置于菊花原材料重量50倍的95℃水中进行漂烫30min，之后，降温至75‑80℃浸泡40min，然后，过滤除渣，得到菊花提取液，备用；步骤四：晶状体细胞培养液的制备：按照体积比，取2‑3份步骤一得到的枸杞提取液和1‑2份步骤二得到的菊花提取液进行混合，之后，向混合液中加入干粉细胞培养基12.0g，至混合均匀，在室温环境下进行0.22μm过滤除菌，之后，转至于100ml的培养瓶中用于晶状体细胞的培养；步骤四：晶状体细胞的培养：用上述制备得到的培养基，添加胎牛血清、谷氨酰胺、丙酮酸钠和青链霉素合剂等，并调整PH值为7.2‑7.4，预热备用，解冻晶状体细胞于60cm培养皿预热的培养基中，在饱和湿度、37℃的CO₂培养箱中培养过夜至贴壁，次日，换液继续培养，等待细胞观察及检测。