[发明专利]一种高通量检测生物体血液样本中113种脂质的液质联用方法

摘要

一种高通量检测生物体血液样本中113种脂质的液质联用方法，其属于生物分析化学领域。该方法采用将待测样本预处理并加入反应溶剂及萃取剂萃取后，进行液相‑质谱检测。该方法操作简单、选择性高、灵敏度高，能快速检测血液中113种脂质，其中磷脂酰胆碱（PC）48个，溶血磷脂酰胆碱（Lyso‑PC）21个，磷脂酰乙醇胺（PE）17个，溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）4个，溶血磷酯酰肌醇（PI）6个，鞘磷脂（SM）9个，神经酰胺（Cer）8个。该方法的精密度符合血清样本分析的要求、稳定性良好，对于大部分脂质类代谢物的检测灵敏度较高，适用于血清样本的脂质组学分析。

主权项

一种高通量检测生物体血液样本中113种脂质的液质联用方法，采用超高效液相色谱分离与电喷雾离子源高分辨串联飞行时间质谱（ESI‑Q‑TOF‑MS）正、负离子扫描模式对样本中系列脂质成分检测分析，其特征在于， 所述方法包括以下步骤：（1）标准物数据库的建立根据ESI源下的离子化形式及化学式，得到每种化合物母离子的精确质量数，形成TOF/MS数据库；在Q‑TOF/MS模式下，分别采集每种脂质标准物在3个不同碰撞能量下的碎片离子质谱图，形成Q‑TOF/MS数据库；（2）生物血液样本处理取血浆加入混合内标溶液，再加入提取液，离心；取下清，氮气吹干后，加入复溶液进行复溶，得到待测样品；所述提取液为体积比2:1的氯仿与甲醇的混合液；所述混合内标溶液为含19:0‑19:0 磷脂酰胆碱、17:0‑17:0 磷脂酰乙醇胺、12:0 鞘磷脂、19:0 溶血磷脂酰胆碱浓度均为5 μg/mL的异丙醇‑乙腈溶液；所述复溶液为乙腈：异丙醇体积比为1:1的混合液；（3）定性检测采用HPLC/ESI‑Q‑TOF‑MS 测定待测样品，通过比对样品中保留时间、一级质谱和二级质谱信息，确定样品中是否含有113种目标脂质成分；HPLC色谱条件：柱温：50℃，进样室温度：4℃，流速：0.4 mL/min，进样体积：2μL，流动相：A相: 含10mM/L乙酸铵、体积分数0.1%甲酸的水，B相：含10mM/L乙酸铵、体积分数0.1%甲酸的乙腈‑异丙醇混合液，乙腈‑异丙醇混合液中乙腈：异丙醇的体积比为1:1，流动相梯度洗脱；正离子检测质谱条件为：离子源：ESI源；离子喷雾电压：+5.5kV；涡轮喷射温度(TEM)：550℃；GS1：50 psi；GS2：50 psi；CUR：30psi；TOF MS 和 TOF MS/MS 扫描范围分别为：m/z 100–1500 和50–1200；负离子检测质谱条件为：离子源：ESI源；离子喷雾电压：‑4.5kV；涡轮喷射温度(TEM)：550℃；GS1：50 psi；GS2：50 psi；CUR：30psi；TOF MS 和 TOF‑MS/MS扫描范围分别为：m/z 200–1200和50–1200。