[发明专利]一种适用于菲律宾蛤仔的四倍体化学诱导方法

摘要

本发明涉及一种适用于菲律宾蛤仔的四倍体化学诱导方法，该方法的主要内容包括，菲律宾蛤仔亲贝经充分促熟，催产后，亲贝单个排放配子；选择未被污染、成熟度高的精卵，通过人工授精获得受精卵；受精后13min，加入细胞松弛素CB处理，处理浓度为0.5mg/L，抑制第一极体释放，受精后19min，洗卵，去除CB；将受精卵置于适宜条件下发育，获得四倍体菲律宾蛤仔胚胎；处理过程及发育过程所用海水为砂滤海水，盐度24‑26，温度24.8‑25℃。本发明利用最佳的精、卵，有效提高了受精卵的发育同步性，显著提高了四倍体诱导率，流式细胞术检测的诱导率稳定在50％以上。

主权项

一种适用于菲律宾蛤仔的四倍体化学诱导方法，其特征在于：具体包括步骤如下：(1)选择菲律宾蛤仔亲贝，人工促熟或自然成熟；(2)亲贝阴干4h，置入砂滤海水催产，将开始排放配子的亲贝捡出，淡水冲洗10‑30s，单个置于烧杯，继续排放配子，排放完毕立即捡出亲贝；(3)镜检每杯产物，选择卵子发育良好、未被精子污染的卵液合并，卵液以100μm筛绢过滤去除组织碎片，25μm筛绢收集待用；(4)选择活力良好的精子悬浊液，用25μm筛绢滤除组织碎屑，收集下层液；(5)按精卵数量比3:1‑6:1，将精子迅速加入卵子悬液，迅速搅动卵液使之均匀受精，控制受精卵浓度在800‑1000粒/mL；(6)受精后13min，向受精卵加入CB溶于二甲基亚砜配制的浓度为0.5mg/mL溶液，同时迅速搅动卵液，维持受精卵保持悬浮状态；(7)受精后19min，受精卵置于25μm孔径的筛绢内，流水洗卵15‑20s，去除CB；(8)受精卵重新悬浮于砂滤海水中进行胚胎发育，培育密度15‑20枚卵/ml；(9)受精后24h，胚胎发育至D形幼虫阶段，四倍体胚胎制备完成，用流式细胞术测定四倍体诱导率；(10)对上述步骤中所使用的砂滤海水进行紫外线照射30‑60min，控制砂滤海水温度为24.8‑25℃，盐度为24‑26，pH值为8.0。