[发明专利]利用微波炉-液氮快速提取细菌DNA的方法

摘要

本发明公开了利用微波炉‑液氮快速提取细菌DNA的方法，该方法利用热胀冷缩物理原理破坏细菌细胞壁的新型细菌DNA提取方法。本发明方法可以适用于革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌，是一种低成本，高效率，操作简便的细菌DNA提取方法。应用本发明方法提取的DNA可以满足细菌鉴定、分型等常规的PCR分析。

主权项

1.一种利用微波炉‑液氮快速提取细菌DNA的方法，其特征在于：它包括以下步骤：A)、试剂、材料准备：1)、STE缓冲液配制：称取1.169g NaCl、2.422g Tris、3.632g EDTA溶于200ml去离子水，使用1M NaOH溶液调节pH值至8.0，高压灭菌后，4℃冷藏备用；2)、TE缓冲液配制：称取2.422g Tris、3.632g EDTA溶于200ml去离子水，使用1M NaOH溶液调节pH值至8.0，高压灭菌后，4℃冷藏备用；3）、液氮、微波炉备用；B)、DNA提取：1)、针对液体培养物，无菌环境下，使用1.5mL EP管收集1mL过夜培养菌液，8000g离心3min，倒掉上清，保留沉淀物，加入250μl STE缓冲液重悬沉淀；对平板培养物，无菌环境下，直接用火焰灼烧灭菌后的接种环挑取菌落于提前加有250μl STE缓冲液的1.5mL EP管中重悬；2)、8000g离心3min，去上清；3)、沉淀加入100μl TE缓冲液重悬；4)、将上述步骤3）装有菌悬液的EP管开盖，放置微波炉中高火加热2min，取出，然后立即盖上EP管盖投入装有液氮的保温桶中冷冻30s；5)、夹取液氮冷冻后的细菌EP管，37℃金属浴或水浴解冻2min；6)、14000g、4 ℃离心5 min，上清即为DNA溶液，转移上清至一新EP管中，‑20 ℃保存。