[发明专利]一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法

摘要

本发明公开了一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法，包括NHPrE1细胞系的培养、神经内分泌亚型细胞NTU2分离和纯化、NTU2细胞的扩增、NTU2细胞克隆化、NTU2细胞体外鉴定、NTU2细胞体内鉴定等步骤。本发明本细胞系(NTU2)的建立为前列腺神经内分泌细胞(NEC)的功能研究；神经内分泌细胞在前列腺癌发生和发展中肿瘤生物学作用及其与肿瘤细胞相互分子作用的研究；以及激素非依赖型前列腺癌(CRPC)的新药筛选开发研究提供基础实验材料。

主权项

一种人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系的建立方法，其特征是：包括下列步骤：（1） 人正常前列腺上皮祖细胞系NHPrE1细胞系的培养：1:1 DMEM/F12，加5% FBS，1% ITS，5ng/mL EGF，50ng/mL BPE；于5% CO2，37℃培养；2－3天换液一次，1：3‑4传代；（2）人正常前列腺上皮神经内分泌亚型细胞系NTU2的分离和纯化：将NHPrE1培养细胞用胰蛋白酶酶消化后，1000 RPM离心收集细胞，1× PBS洗涤三次后，用3% BSA于4℃封闭20分钟；加入1:50鼠抗人ChG A抗体，4℃孵育30分钟后，用1×PBS洗涤三次；加入羊抗鼠磁珠抗体，4℃孵育30分钟后，用 mini MACS® Separator进行细胞分离；（3）NTU2细胞的扩增：将分离所得阳性细胞用1:1 DMEM/F12培养液，加5% FBS，1% ITS，5ng/mL EGF，50ng/mL BPE；于5% CO2，37℃培养；每3天换液一次；（4）NTU2细胞克隆化：将扩增NTU2细胞用1:1 DMEM/F12培养液，加5% FBS，1% ITS，5ng/mL EGF，50ng/mL BPE；按0.5个细胞/孔接种至96孔板；每3天换液一次，生长成单细胞克隆后转入培养瓶用上述培养基进行扩增。