[发明专利]一种EGFR基因超低频突变检测试剂盒

摘要

本发明公开了用于检测待测核酸样本目标区域的引物组合物及其应用，其中该引物组合物包括：第一通用引物和第二通用引物，所述第一通用引物和所述第二通用引物的靶点位于所述目标区域的两端，分别用于构成测序文库的5’端和3’端；以及特异性引物组，所述特异性引物组包括n条特异性引物，各特异性引物的结构相同，均是从5’端至3’端依次包括第一核酸序列、连接序列和第二核酸序列。该引物组合物能够有效地用于检测待测核酸样本目标区域的序列信息，尤其是超低频突变的检测，且检测灵敏度高，结果准确可靠。

主权项

一种用于检测待测核酸样本目标区域的引物组合物，其特征在于，包括：第一通用引物和第二通用引物，所述第一通用引物和所述第二通用引物的靶点位于所述目标区域的两端，分别用于构成测序文库的5’端和3’端；以及特异性引物组，所述特异性引物组包括n条特异性引物，各特异性引物的结构相同，均是从5’端至3’端依次包括第一核酸序列、连接序列和第二核酸序列，其中，各特异性引物均满足下列条件：(1)各特异性引物的靶点，均是与所述第一通用引物的靶点分别位于所述目标区域的两端，而与所述第二通用引物的靶点位于所述目标区域的同端；(2)所述第一核酸序列和所述第二核酸序列对应的基因组位置位于所述目标区域的同端；(3)所述第一核酸序列对应的基因组位置与所述目标区域之间的距离，大于所述第二核酸序列对应的基因组位置与所述目标区域之间的距离；(3)所述第一核酸序列和所述第二核酸序列在对应的基因组位置上是连续的，但无碱基重合；(4)所述第一核酸序列的5’端第一个碱基距离目标区域不超过待测核酸样本的碱基长度；(5)所述连接序列由所述第二通用引物的3’端末的24个碱基构成；(6)n＝1‑5的任意整数，以n＝5为例，设所述特异性引物组的各特异性引物分别为：N₁、N₂、N₃、N₄、N₅，以特异性引物的靶点与目标区域之间的距离为衡量标准，各特异性引物之间的距离远近关系为：N₁>N₂>N₃>N₄>N₅。