[发明专利]一种蚯蚓肠道微生物总DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种蚯蚓肠道微生物总DNA的提取方法，该提取方法一方面以蚯蚓新鲜粪便为样品，并对样品进行前处理，一方面将蛋白酶K(消化)与土壤DNA提取试剂盒联用，从而使本发明提取方法解决了现有方法无法克服泥沙干扰，造成的蚯蚓肠道微生物总DNA提取效率低的问题；本发明提取方法大大提高了蚯蚓肠道微生物总DNA的提取效率和提取质量，采用1％琼脂糖凝胶电泳检测得到的总DNA条带明亮清晰，从而能够更加准确全面反应蚯蚓肠道内微生物的状况，为后续微生物群落结构与功能的研究奠定了基础。

主权项

一种蚯蚓肠道微生物总DNA的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，提取某条实验蚯蚓的新鲜粪便，冷冻储存；将该实验蚯蚓放回其原生长环境12小时后，再次提取其新鲜粪便，将前后两次提取的粪便混合，并于4℃下冷冻储存；步骤2，往0.1～0.5g蚯蚓新鲜粪便中依次加入20μL蛋白酶K和100～200μL缓冲液，混合均匀后于56℃下水浴加热，加热后得到液相A；步骤3，将步骤3的液相A使用土壤基因组DNA提取试剂盒进行DNA的提取，得到蚯蚓肠道微生物总DNA；步骤4，使用微量紫外可见分光光度计，进行DNA含量的测定；步骤5，使用质量百分浓度为1％的琼脂糖凝胶电泳检测得到蚯蚓肠道微生物总DNA的质量。