[发明专利]一种通过环糊精表面接枝来提高蛋白质结晶成功率的方法

摘要

本发明提供了一种通过环糊精表面接枝来提高蛋白质结晶成功率的方法，首先对结晶板表面进行处理，使结晶板表面羟基化，采用环糊精或其衍生物修饰结晶板表面；然后配置蛋白溶液，最终建立蛋白质结晶体系，进行结晶。本发明只需要对结晶板进行两步处理即可得到表面接枝环糊精的结晶板，一次可处理大量结晶板，同时工艺简单，避免了逐一添加异相形核剂的人工与时间耗费。通过本发明，结晶成功率的提高最大可达到现有技术的2倍以上。

主权项

1.一种通过环糊精表面接枝来提高蛋白质结晶成功率的方法，其特征在于包括下述步骤：(a)对结晶板表面进行处理，包括以下内容：用H₂O、98wt％浓硫酸和K₂Cr₂O₇配置成处理液，其中H₂O、浓硫酸和K₂Cr₂O₇所占的质量份数为(30～70)：(30～70)：(0.5～5)，用处理液浸泡材质为聚苯乙烯的结晶板20min～240min；然后用去离子水将浸泡后的结晶板表面冲洗干净；将结晶板放入1～20wt％的50～70℃稀硫酸溶液中浸泡1～24h；最后用去离子水清洗干净，即得到表面含有羟基的结晶板；将表面含有羟基的结晶板放入用醋酸调pH为4～7、含0.5～2vol％2，3‑环氧丙氧基三甲氧基硅烷、0.5～2vol％H₂O的乙醇溶液中室温浸泡6～24h，取出后用乙醇冲洗数次，再用去离子水清洗干净，N₂吹干；然后，再将其浸入0.01～0.2wt％环糊精或其衍生物的无水乙醇溶液中，于75℃浸泡5～10h，取出后依次用乙醇和去离子水冲洗干净，N₂吹干，得到环糊精或其衍生物表面接枝的结晶板；所述的环糊精的衍生物为环糊精、烯丙基‑环糊精、羟丙基‑环糊精、羟丁基‑环糊精、己二胺基‑环糊精、对甲苯磺酰基环糊精、聚合环糊精、乙二胺‑环糊精、甲基‑环糊精、巯基‑环糊精或羧甲基‑环糊精； (b)配置用于溶解蛋白质的缓冲液，使pH值在3～10，浓度范围为0.001～1M，溶解蛋白质，得到终浓度为1～100mg/ml蛋白溶液；(c)将结晶试剂与蛋白溶液按照体积比为(0.01～50)：1滴加在环糊精或其衍生物表面接枝的结晶板中，建立蛋白质结晶体系用于结晶；(d)将蛋白质结晶体系在0～60℃环境下静置1～720h结晶；在显微镜下统计出现蛋白质晶体的条件数目。