[发明专利]5-O-[4′-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸的提取方法及其应用

摘要

本发明公开了一种5‑O‑[4′‑O‑(β‑D‑吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸的提取方法：忍冬藤药材粉碎及提取，大孔吸附树脂柱、凝胶柱、半制备HPLC依次分离纯化。所得对照品1H‑NMR图谱中未观察到杂质氢信号；经HPLC纯度检查，不同色谱柱和流动相测定结果表明均为一个主色谱峰；以峰面积归一化法测定含量大于98％。本发明方法操作简便，步骤简单；有机溶剂用量少，所有试剂均可回收利用，分离成本低。产品纯度高，可作为对照品使用，用于相关中药材、中成药的活性及质量控制研究。

主权项

1.一种5‑O‑[4′‑O‑(β‑D‑吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸的提取方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将忍冬藤药材粉碎，加4～10倍质量体积分数为30～70％的甲醇或乙醇溶液，超声功率500W，频率40kHz提取2～3次，每次0.5～1小时，合并提取液并滤过，减压回收提取溶剂至干，得到干浸膏a；(2)取干浸膏a，加1～2倍质量的水溶解，以大孔吸附树脂柱进行纯化，柱填料用量为干浸膏重量的1～2倍，以水为洗脱溶剂，洗脱3～4个柱体积，收集洗脱液并合并，减压回收溶剂至干，得到干浸膏b；大孔吸附树脂型号为D101或AB‑8型大孔吸附树脂；(3)取干浸膏b，加等质量水使溶解得水溶液，以凝胶柱进行纯化，柱体积为水溶液体积的10～20倍，以水为洗脱溶剂，洗脱3～4个柱体积，以30～40分之一柱体积作为一份收集洗脱液，以HPLC进行检测，合并含有目标成分的洗脱液，减压回收溶剂至干，以凝胶柱反复纯化2～4次，得干浸膏c；凝胶柱中凝胶型号为Sephadex G‑25或Sephadex LH‑20型凝胶；(4)以半制备HPLC继续纯化，收集含有目标成分的洗脱液，收集液经浓缩干燥即得，5‑O‑[4′‑O‑(β‑D‑吡喃葡萄糖基)咖啡酰基]奎宁酸含量大于98％；步骤(3)和(4)中HPLC条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈‑0.1～1％冰醋酸溶液，两者体积比为(3～10):(97～90)，或流动相为甲醇‑0.1～1％冰醋酸溶液，两者体积比(6～20):(94～80)；检测波长为327nm。