[发明专利]一种福寿螺卵巢细胞系的构建方法

摘要

本发明公开了一种福寿螺卵巢细胞系的构建方法，属于淡水生物细胞培养技术领域。它的步骤如下：配制细胞培养液；选取体重30‑40克的雌福寿螺在无菌水中饲养；对雌福寿螺进行表面消毒；解剖福寿螺取卵巢组织；将卵巢组织用PBS清洗液清洗并剪碎；将处理后的卵巢组织接种于细胞培养瓶中；培养瓶置于5％的CO₂培养箱内,28℃恒温培养；过夜后，再加入适量细胞培养液，将组织浸没；每隔5天吸出和换入等量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶。本发明能在较短时间内快速、可重复地建立福寿螺卵巢组织细胞系，所需要的细胞培养设备简单，可操作性强。本发明是对水生无脊椎动物细胞培养的重要补充，也为水生无脊椎动物的免疫机制研究提供基础资料。

主权项

一种福寿螺卵巢细胞系的构建方法，其特征在于，该方法依次进行以下步骤：(1)配制细胞原代培养液和细胞传代培养液；(2)选取体重30‑40克福寿螺在无菌水中饲养12小时；(3)在无菌条件下，将雌福寿螺浸没在70％或75％乙醇溶液中，进行表面消毒10‑15分钟；(4)用无菌蒸馏水清洗福寿螺3‑5次；(5)用无菌滤纸吸干福寿螺表面水分；(6)将福寿螺置于75％酒精消毒过的解剖盘中，解剖福寿螺；(7)用解剖剪刀剪取福寿螺卵巢组织，放入盛有HBSS清洗液的六孔培养板里面清洗3‑5次，最后一次清洗时，用无菌剪刀将寿螺卵巢组织剪成1mm³的小组织块；(8)将经过(7)处理后的组织接种于含有1‑1.5mL细胞原代培养液的T‑25cm²细胞培养瓶中；(9)将培养瓶置于5％的CO₂培养箱内,28℃恒温培养；(10)过夜后，再加入2mL‑3.0mL细胞传代培养液，使组织浸没在培养液中，每隔5‑7天吸出和换入60‑70％量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；(11)将培养瓶中的贴壁细胞轻轻吹打，使细胞悬浮,取2‑3mL细胞悬液放入含有1‑2ml细胞传代培养液的新培养瓶中，每隔5‑7天吸出和换入50％量的细胞培养液，直至扩展并增殖的细胞充满培养瓶；保持整个操作过程都在无菌条件下进行。