[发明专利]海洋萎缩芽孢杆菌外源DNA的转入方法

摘要

本发明提供了一种海洋萎缩芽孢杆菌外源DNA的转入方法，包括如下步骤：对供体菌株、辅助菌株和受体菌株分别进行培养，并分别检测供体菌株培养液、辅助菌株培养液和受体菌株培养液的OD₆₀₀；将前步骤中培养后的供体菌株、辅助菌株和受体菌株等量混匀，进行三亲本杂交，并筛选出杂交成功的菌株，记为三亲本杂交菌株；筛选出带有质粒菌株的萎缩芽孢杆菌C89/pRP1028；提取质粒pRP1028；将质粒pRP1028转化到大肠杆菌中，并提取大肠杆菌的质粒，进行测序验证。本发明具有如下的有益效果：对特殊培养和难于转化菌株的外源基因的转化带有借鉴意义。

主权项

1.一种海洋萎缩芽孢杆菌外源DNA的转入方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：对供体菌株、辅助菌株和受体菌株分别进行培养，控制所述供体菌株和辅助菌株的培养温度为37℃，所述受体菌株的培养温度为28～37℃，并分别检测供体菌株、辅助菌株和受体菌株培养后培养液的600nm吸收值；S2：将步骤S1中培养后的供体菌株、辅助菌株和受体菌株等量混匀，进行三亲本杂交，并筛选出杂交成功的菌株，记为三亲本杂交菌株；三亲本杂交是在牛肉膏蛋白胨培养基中进行的，所述牛肉膏蛋白胨培养基是由10g蛋白胨、3～5g牛肉膏，5g氯化钠溶解于1L人工海水中形成的，所述人工海水的组份及含量为：26.518g/L的NaCl、2.447g/L的MgCl2、3.305g/L的MgSO4、1.141g/L的CaCl2、0.725g/L的KCl、0.202g/L的NaHCO3以及0.083g/L的NaBr，溶剂为蒸馏水，该人工海水的pH为7.0～7.2；S3：从所述三亲本杂交菌株中筛选出带有质粒菌株的萎缩芽孢杆菌C89/pRP1028；S4：从所述带有质粒菌株的萎缩芽孢杆菌C89/pRP1028中提取质粒pRP1028；S5：将所述质粒pRP1028转化到大肠杆菌中，并提取大肠杆菌的质粒，进行测序验证。