[发明专利]一种高转化效率感受态细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种高转化效率感受态细胞的制备方法，涉及微生物技术领域，解决现有技术操作不便、转化效率和得率低的问题。步骤为(1)菌种在LB平板上划线，37℃过夜培养；(2)接种于SOC培养基，18℃，250rpm震荡培养至OD600值在2.0‑5.0之间；(3)菌液在灭过菌的50mL管中，2500g/5min，4℃条件下离心，弃上清，沉淀菌种加入缓冲液，手动重悬；(4)2500g/5min，4℃离心，弃上清，加入适量缓冲液和DMSO，使OD600值为5.0，DMSO终浓度为7％；(5)分装到无菌的EP管中，放入液氮中速冻，即得。本发明操作简单，得率高，转化效率可达1×108‑5×109。

主权项

一种高转化效率感受态细胞的制备方法，其步骤为：(1)将大肠杆菌在不含抗性的LB平板上划线，37℃过夜培养得微生物单菌落；(2)取微生物单菌落接种于含有250mL SOC培养基的1L锥形瓶中培养，18℃，250rpm条件下震荡培养至OD600值在2.0‑5.0之间；(3)将震荡培养所得的菌液转移至灭过菌的50mL管中，2500g/5min，4℃条件下离心，弃上清，将沉淀菌种加入已提前在4℃预冷的缓冲液，手动重悬；(4)将步骤(3)所得的培养液在2500g/5min，4℃条件下离心，弃上清，加入缓冲液和DMSO，使重悬后OD600值为5.0，DMSO终浓度为7％；(5)将步骤(4)所得的培养液分装到EP管，然后放入液氮中速冻，储存于‑80℃冰箱中，即得。