[发明专利]一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法

摘要

本发明公开了一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法，它包括铜纳米簇原液的制备、叶酸的活化、叶酸标记铜纳米簇的制备等步骤。本发明制备的铜纳米簇具有显著的抑制MCF‑7肿瘤细胞的增殖作用，并且能促进MCF‑7细胞凋亡，证明其具有一定的抗乳腺癌肿瘤细胞的活性，动物实验结果表明，本发明能抑制MCF‑7细胞裸鼠成瘤，进一步证明了其抗肿瘤细胞活性。由于本发明的铜纳米簇采用了叶酸进行标记，因此还具有明显的靶向性，可用于乳腺癌的临床靶向治疗。

主权项

一种叶酸标记铜纳米簇的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)铜纳米簇原液的制备：将BSA溶解在水中配成浓度为15～20mg/ml的澄清透明溶液，按照BSA∶Cu²⁺重量比为(10～40)∶(1～10)的比例加入铜离子，混合均匀，边搅拌边调节pH至碱性，在37～60℃下搅拌反应6～8h，然后再调节溶液pH至酸性，生成铜纳米簇沉淀，将铜纳米簇沉淀离心、分离、清洗后重新溶解在Tris‑HCl缓冲液中并调节pH至碱性，即获得铜纳米簇原液；2)叶酸的活化：将叶酸溶解在DMSO中配成浓度为0.2～0.5mg/ml的叶酸溶液，然后按体积分别加入0.5～2％的10～50mg/ml的EDC水溶液和10～50mg/ml的NHS水溶液，在黑暗、40～60℃条件下陈化10～15h，得活化的叶酸溶液；3)叶酸标记铜纳米簇的制备：将活化的叶酸溶液与5～20倍体积的Tris‑HCl缓冲液混合，然后再与步骤1)得到的铜纳米簇原液混合，所述铜纳米簇原液的体积为活化的叶酸溶液体积的15～30倍，在黑暗，40～60℃下反应10～15h，然后调节pH至3～6，生成叶酸标记的铜纳米簇沉淀，将沉淀离心、分离、清洗后重新分散在Tris‑HCl缓冲液中形成澄清透明的溶液，调节溶液的pH值至9～12，即获得叶酸标记铜纳米簇。