[发明专利]磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法

摘要

本发明公开了一种磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法。其步骤是：S1、取粪便于离心管中，加入buffer A，破碎静置，取上清液于新的离心管中；S2、向上清液中先后加入buffer B和buffer C，水浴加热；S3、DNA/RNA的吸附：裂解完成后，先后加入buffer D和buffer E，涡旋振荡、静置、磁分离，留下固体物；S4、向留下固体物的离心管先后加入buffer F和buffer G，涡旋振荡，磁分离；S5、在经过步骤4处理后的离心管中加入buffer H，涡旋振荡、水浴加热、再次涡旋振荡，冷却并磁分离，将上清液移到新的离心管中备用。

主权项

一种磁珠法粪便细菌基因组DNA/病毒RNA快速提取方法，其特征在于：该提取方法的步骤是：S1、粪便前处理：称取人或动物粪便于离心管中，加入buffer A，待粪便充分破碎后进行静置，待离心管固体沉淀、有上清液析出时，取上清液于新的离心管中，以备后续实验；所述buffer A由浓度为0.1～1M磷酸二氢钾和浓度为0.1～1M的氯化钠溶液按体积比1：1～5混合而成；S2、粪便中微生物的裂解：向盛放初级上清液的离心管中先后加入buffer B和buffer C，涡旋振荡混合均匀，在低于摄氏100度的条件下水浴加热；所述buffer B由浓度0.1～10mol/L胍盐、浓度1～50mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和浓度10～100mmol/L的十二烷基硫酸钠按体积比1：1～3：1～5混合而成；pH值范围为4.0～7.0；所述buffer C为1～50mg/mL蛋白酶K；S3、DNA/RNA的吸附：裂解完成后，先后加入buffer D和buffer E，涡旋振荡，在充分混匀后静置；然后将静置后的离心管放入磁力架上进行磁分离，去除离心管中的液体，留下固体物；所述buffer D为磁珠；所述buffer E为体积浓度20～80％的醇溶液；S4、残留杂质的去除：向留下固体物的离心管先后加入buffer F和buffer G，涡旋振荡，充分混匀后进行磁分离；所述buffer F由浓度0.1～10mol/L盐溶液和浓度1～50mmol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸盐按体积比1：1～5混合而成，pH值为5～10；所述Buffer G为1～50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液；S5、DNA/RNA的洗脱：在经过步骤4处理后的离心管中加入buffer H，涡旋振荡，待充分混匀后进行水浴加热；然后再次涡旋振荡，充分混匀，冷却到室温后进行磁分离，得到含有基因组NDA/RNA的洗脱液，将洗脱液移到新的离心管中备用；所述buffer H为浓度0.1～10mol/L盐酸盐溶液，pH值为6～10。