[发明专利]一种同时分离外周血T、B淋巴细胞的方法

摘要

本发明公开了一种同时分离外周血T、B淋巴细胞的方法。该方法是改良的尼龙毛柱分离法，能实现一次性同时分离获得T淋巴细胞核B淋巴细胞两种细胞，细胞的产量高，交叉污染少，对细胞的生物活性无任何影响，便于开展下一步的实验研究。

主权项

1.一种同时分离外周血T、B淋巴细胞的方法，所述方法包括如下步骤：(1)将尼龙毛撕碎后用水煮沸、然后冷却，重复煮沸和冷却多次，再用酸浸泡经煮沸冷却反复处理后的尼龙毛，烘干酸浸泡后的尼龙毛后，再次将尼龙毛撕碎至单纤维状态，将撕碎的尼龙毛装入5毫升的注射器针筒中，制成尼龙毛柱管，每支注射器针筒中装入0.3—0.7克撕碎的尼龙毛；将至少3支10毫升注射器用酸浸泡后水洗，烘干灭菌后作为尼龙毛柱外套管备用；(2)在体外制备混合淋巴细胞悬液，备用；(3)用37℃预热的1640完全培养基注入尼龙毛柱管的尼龙毛中，确保将全部尼龙毛完全湿润；吸取预热至37℃的混合淋巴细胞悬液加入尼龙毛柱，再向尼龙毛柱中加入数滴37℃的1640完全培养基后将尼龙毛柱管置于37℃培养箱孵育；(4)将尼龙毛柱管置于尼龙毛柱外套管中，尼龙毛柱外套管下端连接输液器管，输液器管末端连接离心管；输液器管上设有流量开关和流量调节夹；(5)用移液器吸取5毫升37℃的1640完全培养基，缓慢注入尼龙毛柱管，通过调节流量开关和流量调节夹控制进入离心管的滤过液滴速为1滴/分钟；待5毫升1640完全培养基全部滤过后，将离心管收集的滤过液离心，再用37℃的1640完全培养基重悬细胞，得到T淋巴细胞；(6)将经步骤(5)处理后的尼龙毛柱管放入新的尼龙毛柱外套管中，用移液器吸取10毫升37℃的1640完全培养基，缓慢注入尼龙毛柱管，通过调节流量开关和流量调节夹控制进入离心管的滤过液滴速为1滴/分钟；待10毫升1640完全培养基全部滤过后，将离心管收集的滤过液离心，弃掉上清，得到T、B淋巴细胞混合物；(7)将经步骤(6)处理后的尼龙毛柱管放入新的尼龙毛柱外套管中，用移液器吸取5毫升4℃的1640完全培养基，注入尼龙毛柱管，通过调节流量开关和流量调节夹控制进入离心管的滤过液滴速为100滴/分钟；待5毫升1640完全培养基全部滤过后，将离心管收集的滤过液离心，弃掉上清，再用37℃的1640完全培养基重悬细胞，得到B淋巴细胞。