[发明专利]一株重组大肠杆菌及其在制备具有人血型B抗原活性的N‑糖蛋白中的应用

摘要

本发明公开了一株重组大肠杆菌，命名为重组大肠杆菌CEBO86，是将构建的重组质粒pACT3‑PglB和pBAD24‑malE^M共转化已缺失waal基因的大肠杆菌CLM24中获得，该重组大肠杆菌的基因型为CLM24/p‑pglB+p‑malE^M，有能同时表达PglB和malE^M基因的功能。利用本发明所述重组大肠杆菌能够发酵制备具有人血型B抗原活性的N‑糖蛋白，且生产步骤简单，生产周期短，产量高，生产成本低，可实现N‑糖蛋白的大规模生产；制备获得的N‑糖蛋白具有良好的B抗原活性，可高效吸附人血浆中的抗B抗体，为通用血产品的制备提供新的选择方案，同时，可用于血型不兼容的器官移植，具有良好的工业开发和应用前景。

主权项

一株重组大肠杆菌，该菌株命名为重组大肠杆菌CEBO86，其特征在于：所述重组大肠杆菌由如下方法制得：构建含有PglB基因的pACT3‑PglB的重组质粒和含有malE^M基因的pBAD24‑malE^M的重组质粒，然后将上述构建的重组质粒pACT3‑PglB和pBAD24‑malE^M共转化已缺失waal基因的大肠杆菌CLM24中，得到能同时表达PglB和malE^M基因的重组大肠杆菌，其基因型为CLM24/p‑pglB+p‑malE^M，该菌株即为重组大肠杆菌CEBO86；其中，所述malE^M基因来源于质粒pMAL‑p5X，所述PglB基因来源于空肠弯曲杆菌NCTC 11168；上述malE^M基因为malE基因突变体，是通过在malE基因的3’末端插入一段核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的表达糖基化序列的基因所得；上述大肠杆菌CLM24是通过敲除出发菌株大肠杆菌O86的waaL基因而构建的大肠杆菌工程菌，其基因型为O86Δwaal。