[发明专利]一种检测乳腺癌HER2基因的方法

摘要

本发明公开了一种检测乳腺癌HER2基因的方法，包括免疫组织化学染色法、荧光原位杂交法和双色银染原位杂交法；与现有技术相比，本发明能够快速检测判定乳腺癌HER2基因，为治疗乳腺癌的医疗技术奠定了基础，减轻患者的痛苦及提高患者生存率，具有推广使用的价值。

主权项

一种检测乳腺癌HER2基因的方法，其特征在于：包括免疫组织化学染色法、荧光原位杂交法和双色银染原位杂交法；所述免疫组织化学染色法包括以下步骤：石蜡切片脱蜡入水后,放入乙二胺四乙酸二钠认修复液在高压锅内抗原修复，再经PBS液冲洗后,3％H₂ O₂ 10min,PBS液冲洗后加入一抗4℃过夜，复苏1小时，PBS液冲洗,加入二抗37℃40min，PBS液冲洗后，加入DAB显色液,镜下观察信号并适时终止显色，苏木精复染，脱水、透明、封片；所述荧光原位杂交法包括以下步骤：石蜡切片4μm厚，常规脱蜡，甲醇中浸泡5min后空气干燥，0.03％H₂ O₂和85％甲酸混合液中避光20min，用0.01mol/L HCL洗3min，将切片置于0.01mol/L HCL，系列70％→90％→100％梯度脱水各3min后空气干燥15min，于聚丙烯睛液80℃预热，用0.01mol/L HCL洗涤，酸性乙醇系列脱水后晾干，加蛋白酶工作液37℃预热10min，用0.01mol/L HCL洗10min，酸性乙醇系列脱水后晾干，加固定液，7％甲醛PBS15min冲洗，蒸馏水冲洗5min，中性乙醇梯度脱水各3min后晾干，加10μl探针，加盖玻片；80℃变性5min，杂交过夜16小时以上，PBS泡掉盖玻片，在42℃PanWash洗液中孵育2min，PBS冲洗，经中性乙醇梯度脱水后避光干燥15min，加二眯基苯基吲哚封片,荧光显微镜观察结果；所述双色银染原位杂交法包括以下步骤：(1)组织蜡块切片：厚度设置为，连续切片；(2)烤片：将载波片置于供烤约小时，至蜡融；(3)将切片放入牛奶中浸泡10‑15min；(4)将处理好的切片放入全自动切片染色机上进行。