[发明专利]鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备

摘要

本发明涉及一种鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备方法，其包括以下步骤：1）鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感病毒共存种毒的制备，2）抗原的制备，3）抗原离心，4）抗原灭活，5）乳化，最终得到成品三联疫苗。本发明通过优化病毒培养工艺，减少了鸡胚使用量，降低生产成本，提高了劳动效率，提高了三种病毒抗原效价，成品抗原不需浓缩，提高了疫苗稳定性与使用效果。

主权项

一种鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：1)鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感病毒共存种毒的制备：取符合要求的鸡新城疫种毒、传染性支气管炎种毒、禽流感病毒种毒，将这三种种毒分别稀释10000‑50000倍，然后将三种稀释后的种毒等量混合接种10‑11日龄SPF鸡胚，将接种后的鸡胚置37℃培养48‑72小时，培养期间，培养至48小时开始每4‑8小时照蛋一次，弃去48小时前死亡的鸡胚，将48小时后死亡的鸡胚及时取出并置于2‑8℃冷藏12‑24小时，收获死胚胚液，将收获的死胚胚液冷冻7‑10天后作为生产抗原用的种毒，即共存病毒种毒；2)抗原的制备将共存病毒种毒稀释5000‑20000倍，接种10‑11日龄鸡胚，置36℃培养48小时，48小时后将温度升至37.5℃继续培养至72小时，48‑72小时之间每4‑8小时照蛋一次，弃去48小时前死亡的鸡胚，将48小时后死亡的鸡胚及72小时的活胚及时取出并置2‑8℃冷藏12‑24小时，收获48‑72小时的死胚胚液以及培养至72小时的活胚胚液，得到抗原，将抗原置于2‑8℃保存；3)抗原离心：将收获的抗原混合于移动罐中，经过连续离心机离心，去除抗原中的杂质；4)抗原的灭活：将上述离心后的抗原置于灭活罐内，加入浓度为10%的甲醛溶液，混合均匀，甲醛溶液的最终浓度为0.1%，然后开启灭活罐搅拌器及水箱循环水开始灭活，当灭活罐内液体温度达到37℃时，灭活16‑20小时，灭活完成后将抗原置于2～8℃保存；5)乳化：制备水相：将灭活后的抗原加入抗原体积4%的吐温，混合均匀作为水相，将水相通过温控系统升温至26‑28℃，然后使用酸碱调整水相pH值至6.9‑7.1之间；制备油相：取白油94份，司本‑80 6份，混合后加热，另加硬脂酸铝2份，边加边搅拌至透明，灭菌，得到油相，将灭菌后的油相通过温控系统调节温度至26‑28℃；混合乳化：将油相与水相按体积比2.5‑3：1混合，在26‑28℃进行乳化，得到鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感三联灭活疫苗。