[发明专利]一种基于生物素‑亲和素放大系统的高灵敏检测OA的方法

摘要

本发明公开了一种基于生物素‑亲和素放大系统的高灵敏检测OA的方法，属于食品检测领域，特别涉及利用生物素和亲和素之间高亲和性的连接，构成信号放大系统。还涉及到BNHS标记SAb形成SAb‑BNHS。OA‑BSA与溶液中游离的OA竞争性的结合MAb，然后通过SAb和BSAS的放大作用，使得信号极大增强，检测限降低，检测范围增大。本发明方法的检测限为0.07μg/L，检测范围为0.01‑10μg/L，同时检测限远低于基于PP2A的试剂盒(50μg/kg)和小鼠生物法(200μg/kg)。

主权项

一种基于生物素‑亲和素放大系统的高灵敏检测OA的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向96孔板中加入150μl OA‑BSA，35℃孵育1h。用pH7.2‑7.4的磷酸盐缓冲液PBS+体积分数0.1％的Tween20制成PBST洗液。倒掉多孔板中液体，向每孔中加入250μl PBST，震荡2min，此为洗板步骤，重复该步骤3次。(2)倒掉多孔板中液体，向每孔中加入250μl质量分数为1％的牛血清白蛋白BSA溶液，35℃孵育1h后洗板。(3)向每孔中加入100μl OA标准品或样品和100μl OA单克隆抗体MAb，35℃孵育30min后洗板。(4)向每孔中加入150μl羊抗鼠二抗‑生物素‑N‑琥珀酰亚胺酯即SAb‑BNHS，35℃孵育30min后洗板。(5)向每孔中加入150μl亲和素‑辣根过氧化物酶即SA‑HRP溶液，35℃孵育30min后洗板。(6)向每孔中加入150μl显色底物TMB，35℃孵育20min。(7)向每孔中加入150μl HCl，450nm处检测吸光度。(8)根据OA标准品的吸光度A与空白浓度的吸光度A₀，做出A/A₀‑浓度对数的标准曲线，然后根据样品的吸光度，计算得到样品中大田软海绵酸的浓度。