[发明专利]一种无病毒草莓的培养方法

摘要

本发明公开了一种无病毒草莓的培养方法，涉及草莓种植技术领域，根据病毒在植物体内分布不均匀的理论，植物茎尖分生组织一般不带病毒的，所以通常采用0.1毫米左右的茎尖分生组织，带1‑2个叶原基，进行培养，即可得到无病毒苗，故而无需进行病毒鉴定工作即可进行扩大繁殖；本发明具有如下优点：其一是人为的控制生长条件，不受自然条件的影响；其二是不受草莓体其他部分干扰的情况下，研究被培养的茎尖、茎段生长和分化规律；其三是取材量小，培养材料经济；其四是生长周期短，繁殖系数大；其五是管理方便，可采用自动化生产；其六是脱去病毒，实现快速繁殖，保持种质资源；其七是产量高、品质好、耐储运，为草莓的进一步研究提供了科技支撑。

主权项

一种无病毒草莓的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)热处理脱毒：将草莓植株在40～41℃温度下热处理4～6周，然后取微茎尖培养；(2)微茎尖脱毒：a.初代培养,取草莓生长健壮的母株或匍匐茎上的顶芽，用自来水流水冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，在无菌条件下，用0.5％次氯酸钠溶液表面消毒5min，并不停地搅动促进药液的渗透,在无菌条件和解剖显微镜下剥取茎尖分生组织，以带有一个叶原基的茎尖为度,茎尖分离后，迅速接入MS+6‑苄氨基嘌呤0.25mg/L+萘乙酸0.25mg/L的培养基中直至培养出含20～30个小芽的芽丛,培养条件为22～25℃，日照16～18h光强3000lx；b.继代培养,把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大，待苗长大到1～2cm时，将芽丛小块分成单株，再转入前述步骤a中的培养基中，重复上述过程，扩大繁殖；c.生根培养，在培养基中加入萘乙酸，使发根整齐，将具有两片以上正常叶的新茎从试管中取出进行试管外生根；d.驯化,用镊子把草莓苗从试管瓶中取出，洗掉根系附带的培养基，事先备好8×8cm或6×6cm的塑料营养钵，内装等量的腐殖土和河砂，栽前压实，浇透水，用足签在钵中央打一小孔，将试管苗插入其中，压实苗基部周围基质，栽后轻浇薄水，以利幼苗基部和基质密合，直至根系生出，逐渐降低湿度和土壤含水量；(3)花药培养,包括取材、培养以及植株分化三个步骤，取花粉发育单核期的花蕾，置于洁净培养皿中，内放一层滤纸，滴蒸馏水数滴保湿，将培养皿的花蕾放入3～4℃冰箱中低温保存3～4天，经低温保存处理后的花蕾先在70％酒精中浸泡半分钟，取出放入新配制的饱和漂白粉上清夜中消毒10min，再用无菌水冲洗3次，然后在超净工作台上剥取花药，立即接种，培养条件为24～26℃，日照10h，光强1500lx,20天后产生乳白色的愈伤组织，将诱导出的花药愈伤组织转移至MS培养基，添加GA0.5、BA0.5和三十烷醇4，愈伤组织经培养后转绿，以后微带淡紫红色，15天后在表面分化出半球形小突起，转为绿色，20天后分化出幼叶、幼茎，并有突起物，再分化出新梢，进入正常幼苗的生长发育管理阶段。