[发明专利]可以悬浮培养的猪睾丸细胞株ST-S及其获得方法与应用

摘要

本发明公开了可以悬浮培养的猪睾丸细胞ST‑S及其获得方法与应用。本发明将贴壁培养的ST细胞驯化为可以悬浮培养并稳定传代的ST细胞，命名为ST‑S，ST‑S细胞保持了对猪瘟病毒(CSFV)的敏感性，没有支原体污染。本发明提供了对ST‑S细胞进行大规模工业化悬浮培养方式，适应摇瓶和生物反应器培养。可以利用悬浮培养的ST‑S细胞生产疫苗或其它生物制品，从而简化了病毒生产工艺，增加了产品的稳定性，降低了血清用量和生产成本，提高了生产效率。

主权项

1.可以悬浮培养的猪睾丸细胞株ST-S的获得方法，包括以下步骤：/n1)贴壁培养的ST细胞在塑料培养方瓶中的驯化：不断优化RPMI 1640培养基，依次用RPMI 1640、STM01、STM02、STM03培养基在相同的培养条件下，使贴壁培养的ST细胞的传代比例由通常的1：3驯化为1：5，传代20次，传代间隔由120小时缩短至72小时，将驯化后的ST细胞命名为ST-1，其中所述相同的培养条件为37℃、5％CO₂恒温培养箱；/n2)贴壁培养的ST-1细胞在玻璃转瓶中的驯化：用W/V为0.15％的聚赖氨酸乙酸溶液包被玻璃转瓶瓶壁，用STM04、STM05和STM06培养基依次在1升、10升和15升的转瓶中，将ST-1细胞1：3连续传代30次，获得了贴壁特性降低的ST细胞，命名为ST-2；/n3)ST-2细胞在摇瓶中的初步悬浮驯化：在培养基中添加硫酸葡聚糖、Pluronic F-68和EDTA，继续连续悬浮培养ST-2细胞，进一步降低细胞的成团倾向，获得了初步具有悬浮特征的ST-2细胞；/n4)ST-2细胞在摇瓶中继续悬浮驯化：通过改变培养基中活性因子的量得到ST-LSM-s培养基，用ST-LSM-s培养基继续驯化初步具有悬浮特征的ST-2细胞，获得了可以在含V/V为8％的新生牛血清的ST-LSM-s培养基中悬浮生长的ST细胞，命名为ST-3；/n5)悬浮培养的ST-3细胞的低血清驯化继续驯化ST-3细胞，使其能够在含有V/V为3％的血清的ST-LSM-s的培养基中悬浮生长，将获得的适应3％血清培养的ST细胞命名为ST-S；/n所述STM01、STM02、STM03、STM04、STM05和STM06培养基组成如表1-1所示，ST-LSM-s的培养基组成如表1-2所示。/n