[发明专利]一种鹿流行性出血病病毒琼扩抗体检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测鹿流行性出血病病毒(EHDV)抗体的琼扩检测试剂盒及其制备和使用方法，包括分别放置的EHDV琼扩抗原，EHDV阳性血清、EHDV阴性血清和稀释液。本发明与标准检测方法—病毒中和试验相比，检测环境条件要求低，检测时间短，检测通量高，检测费用低，可快速进行临床样品中鹿流行性出血病病毒抗体检测。

主权项

1.一种检测鹿流行性出血病病毒抗体的琼扩检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括EHDV琼扩抗原和EHDV阳性血清，其中，EHDV琼扩抗原为灭活的EHDV；EHDV阳性血清为EHDV多克隆抗体；该试剂盒还包括：EHDV弱阳性血清、EHDV阴性血清、稀释液、说明书；所述的稀释液配方为含有质量分数为0.5%～1.5%BSA的PBS；所述的EHDV弱阳性血清为EHDV阳性血清稀释32～128倍，分装，冻干而得；所述的检测试剂盒各组成部分的体积或数量如下：EHDV琼扩抗原的制备方法包括：EHDV种毒接种BHK细胞，在细胞病变达85%‑100%时，反复冻融，收获病毒；4000‑8000 rpm离心；取上清，用pH 8.0～8.5的磷酸盐缓冲液透析病毒液24h～48h，换用pH7.0的磷酸盐缓冲液透析病毒液24h～48h，用浓缩剂PEG20000浓缩；采用琼扩法，用标准弱阳性血清校正病毒蛋白含量，分装，冻干即得；EHDV琼扩阳性血清的制备方法包括灭活的鹿流行性出血病病毒加等体积弗氏完全佐剂乳化和弗氏不完全佐剂乳化，先后免疫16～18月龄山羊三次，第一次免疫为FCA和病毒混合物，第二、第三次免疫为FIA和病毒混合物；每次免疫间隔7天，在末次免疫结束后的3～7 天内，颈静脉取少量血，分离血清，采用中和试验检测抗体效价，如检测为阳性，效价大于1:256，则颈部大量取血；分离血清，1.5ml/管分装，冻干，贴上标签，4℃保存。