[发明专利]一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法

摘要

本发明公开了一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，属于细菌检测技术领域。该方法在纳米金颗粒表面修饰能特异性的识别目标细菌的核酸适配子，在稀土上转换荧光颗粒表面修饰与适配子互补配对的cDNA，两种纳米颗粒混合后，由于两段核酸序列的碱基互补配对，两种颗粒的距离被拉近，从而导致上转换荧光颗粒的荧光被纳米金颗粒猝灭。当加入目标物后，目标物会与cDNA竞争性与适配子结合，从而导致上转换纳米颗粒的荧光恢复。根据不同的荧光恢复强度，可以实现对目标细菌的定量测量。本发明方法灵敏度高，特异性强，操作简便，通过适配子序列的改变可以测定各种目标物，在环境监测及食品分析等方面具有十分重要的意义。

主权项

1.一种基于上转换荧光共振能量转移的快速细菌检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)采用表面配体交换法，使用聚丙烯酸对稀土掺杂上转换荧光纳米粒进行水溶性修饰；/n2)合成目标细菌适配子及与该目标细菌适配子碱基互补配对的cDNA单链；/n3)采用缩合反应，完成cDNA单链在经步骤1)水溶性修饰后的稀土掺杂上转换荧光纳米粒表面的再次修饰，得到上转换荧光探针；/n4)采用金-硫反应，完成步骤2)合成的目标细菌适配子在纳米金颗粒表面的修饰，得到纳米金探针；/n5)将步骤3)所得上转换荧光探针与步骤4)所得纳米金探针按1:1的摩尔比混合，并在37℃下孵育30min，得到检测探针，并用荧光光谱测定980nm激发波长时540nm发射波长的荧光值；/n6)制备已知浓度的检测体系，得到不同浓度的菌液，然后用步骤5)制得的检测探针，检测不同浓度的菌液，测定荧光恢复值，绘制标准曲线；/n7)制备待测样品的检测体系，测定待测样品的荧光值，求得待测样品中的目标细菌的数量。/n