[发明专利]一种食品中常见李斯特菌的细菌数值鉴定方法

摘要

本发明公开了一种食品中常见李斯特菌的细菌数值鉴定方法。1.本方法所涉及到的生化反应与目前市场上常见的数值鉴定系统的生化反应不同，结合不同李斯特菌的特异性基因进行验证，优化和确证了本方法的可行性和确信度。2.作为细菌数值鉴定法中最为关键的部分，该方法中菌株对不同生化试验的阳性反应率数据库(data)是通过对全国各地分离到的近2000株菌株进行生化反应后得到的，符合该菌属在中国的实际情况。3.对部分MID‑67鉴定结果不好但分子方法可鉴定出来的菌株，通过本方法可以得到较好的鉴定结果，鉴定百分比可以达到90％以上。

主权项

一种食品中常见李斯特菌的细菌数值鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：a、确定李斯特菌包含的种类，所述的李斯特菌包括单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)、英诺克李斯特菌(Listeria innocua)、绵羊李斯特菌(Listeria ivanovii)、西式李斯特菌(Listeria seeligeri)、威尔氏李斯特菌(Listeria welshimeri)和格式李斯特菌(Listeria grayi)以及11个生化反应，所述的11个生化反应包括七叶甘水解反应，甘露醇产酸反应，麦芽糖产酸反应，鼠李糖产酸反应，塔格糖产酸反应，阿拉伯糖醇产酸反应，1‑磷酸葡萄糖产酸反应，核糖产酸反应，木糖产酸反应，甲基甘露醇产酸反应和绵羊血红细胞溶血反应；b、选择步骤a中的11个生化实验作为数值法中所需要的生化反应：c、建立包括单核细胞增生李斯特菌、英诺克李斯特菌、绵羊李斯特菌、西式李斯特菌、威尔氏李斯特菌和格式李斯特菌的李斯特菌属的数据库，确定数值法中计算方法：根据选择的分类单元与生化实验的阳性概率，形成一个概率矩阵；按照细菌概率鉴定理论确定每一分类单元的总出现频率、多项总发生频率、鉴定百分数的计算方法，具体计算公式如下：每一分类单元的总出现频率等于该分类单元对应的每个生化实验的阳性概率的乘积；多项总发生频率等于每一分类单元的总出现频率的总和；鉴定百分数等于每一分类单元的总出现频率除以多项总发生频率再乘以100％，全体鉴定百分数之和应等于100％；d、待测菌株纯培养后，进行步骤a的11种生化实验；e、获得待测菌株的11种生化实验结果后，根据生化反应的阴、阳，按照计算方法对数据库中所有分类单元进行计算，首先将生化实验值转换成概率值，即实验结果为阳性则就是对应生化实验的阳性概率值；若为阴性则100％减去生化实验的阳性概率值，上述结果若是0或100％，则用近似值1％或99％代替，再按照步骤c的计算方法计算每一个分类单元的总出现频率、多项总发生频率、鉴定百分数；f、根据计算结果，对待测菌株鉴定结果进行判定：根据鉴定百分数的大小进行排序，鉴定百分数最高相对应的菌株即为待测菌株所属的分类单元。