[发明专利]稳定表达粘蛋白Mgfp-5的转基因烟草愈伤组织的培养方法

摘要

本发明公开了稳定表达粘蛋白Mgfp‑5的转基因烟草愈伤组织的培养方法，(1)选取转基因烟草种子，接种于MS固体培养基上培养，得到T1代转基因烟草无菌苗；(2)将步骤(1)中的T1代转基因烟草无菌苗继代培养20d，选取继代培养后的叶片在愈伤组织诱导培养基中诱导培养，得到愈伤组织；(3)切取步骤(2)中所得的愈伤组织在继代培养基中固体或者悬浮继代培养，得继代愈伤组织。本发明稳定表达粘蛋白Mgfp‑5的转基因烟草愈伤组织的培养方法，可以为获得重组蛋白Mgfp‑5的原材料提供新途径，可以拓宽基因工程解决重组蛋白的研究领域，为研究植物表达贻贝粘蛋白提供参考，促进以植物源的重组蛋白Mgfp‑5的生物转化进程。

主权项

1.稳定表达粘蛋白Mgfp‑5的转基因烟草愈伤组织的培养方法，其特征在于，该方法如下：(1)选取转基因烟草种子，接种于MS固体培养基上培养，得到T1代转基因烟草无菌苗；转基因烟草种子为转mgfp‑5基因的烟草种子；所述步骤(1)中的MS固体培养基上仅附加有20mg/L Kan，且无激素；(2)将步骤(1)中所述的T1代转基因烟草无菌苗继代培养20d，选取继代培养后的无菌苗叶片在愈伤组织诱导培养基中诱导培养，得到愈伤组织；愈伤组织诱导培养基为：20mg/L Kan、3w/v％蔗糖、0.7w/v％琼脂的MS固体培养基，该MS固体培养基的pH为6.0；(3)切取步骤(2)中所得的愈伤组织在继代培养基中固体或者悬浮继代培养，得继代愈伤组织；当固体继代培养愈伤组织时，所述继代培养基为：固体培养基MS、2,4‑D 0.5～1.5mg/L、6‑BA 0.1～0.5mg/L、NAA 0.1～0.3mg/L、Kan 20mg/L和蔗糖3％，pH为5.8～6.2；当悬浮继代培养愈伤组织时，所述继代培养基为：液体培养基MS、2,4‑D 0.5～1.5mg/L、6‑BA 0.1～0.5mg/L、NAA0.1～0.3mg/L mg/L、Kan 20mg/L和蔗糖3％；所述烟草种子培养的条件为25±2℃，光照强度为30～50μmol·m‑2·s‑1，每天16h/8h光/暗培养；所述诱导培养的条件为在25±2℃的温度下，黑暗培养20d；所述继代培养的条件为：当固体继代培养愈伤组织时，切取疏松愈伤组织，在固体继代培养基中培养30～33d；当悬浮继代培养愈伤组织时，选取疏松愈伤组织，以接种5％于液体培养基中，25±2℃，100rpm振荡培养20～21d。