[发明专利]一种微反应器专用纳米粒子固定化酶合成异槲皮苷的方法

摘要

一种微反应器专用纳米粒子固定化酶合成异槲皮苷的方法，属于生物催化领域。以石墨烯为固定化酶载体对游离柚皮苷酶进行固定化，加入表面活性剂混匀通入微通道反应器中，可大大提高酶促反应速率和酶的重复利用效率。该方法设计新颖，操作简便，反应条件温和，既可以提高该催化反应的反应速率、解决底物与酶液难分离的缺点，又提高了单位酶量生产异槲皮苷的效率，拓宽了微反应器用于生物催化的领域。

主权项

1.一种微反应器专用纳米粒子固定化酶合成异槲皮苷的方法，其特征在于步骤为：按比例，将10mg石墨烯加入10mL离心管中，再加入20g/L柚皮苷酶2mL，盖紧后用保鲜膜密封，将其置于50℃的水浴摇床中震荡5h，取出离心管后，以10000r/min高速离心10min，除去上清液，向试管中加入2mL纯水离心10min，除去上清液，重复两到三次后，即为固定化柚皮苷酶；将表面活性剂十二烷基苯磺酸钠按照10%的体积比例加入反应体系中，选择微通道反应器，流速控制在8μL/min，反应温度选取50℃，芦丁溶液和固定化柚皮苷酶质量比5:1，底物浓度芦丁设为0.5g/L，溶剂为pH 7的柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液；反应结束后产物和固定化柚皮苷酶混匀在一起，以10000 r/min的转速高速离心10 min，取上清液测HPLC，沉淀石墨烯使用0.2M柠檬酸‑磷酸氢二钠缓冲液清洗两遍以后继续加入底物溶液和表面活性剂后通入微通道反应器中继续催化反应，重复15次；所述微通道反应器由注射泵、反应器本体和接收器三部分通过塑料管连接而成，注射泵调节流速；反应器本体材料为聚甲基丙烯酸甲酯，由一个T‑型双入口和一个出口组成，通道宽200μm，深50μm，长度1m；反应器本体进口设有的不锈钢针连接塑料管，再连接注射器，出口设有的不锈钢针连接塑料管，再连接样品接装置。