[发明专利]一种利用单个B细胞PCR技术生产全猪源单克隆抗体的方法

摘要

本发明公开了一种利用单个B细胞PCR技术生产全猪源单克隆抗体的方法，属于生物技术领域。本发明利用已有的猪抗体基因文库，设计了多套引物，利用套式PCR，从单个B淋巴细胞扩增出抗体可变区基因，进而筛选出具有中和抗体活性的全猪源单克隆抗体。本发明首次建立了一种利用高通量单个B细胞技术生产全猪源单克隆抗体的方法，相较于传统的抗体制备技术具有效率高、全猪源、基因多样性好等优点，本发明的提出为研究猪的抗体免疫应答和分离治疗性抗体提供了一种新的技术手段。

主权项

一种利用单个B细胞PCR技术生产全猪源单克隆抗体的引物组，其特征在于包括：(1)用于单个B淋巴细胞cDNA扩增的引物，所述引物由一条随机引物和4条特异性引物组成，所述的4条特异性引物的序列分别如SEQ ID No.1‑4所示；(2)用于重链可变区编码基因扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.5‑10所示，其中SEQ ID No.5‑7所示的引物用于第一轮扩增，SEQ ID No.8‑10所示的引物用于第二轮扩增；(3)用于轻链λ链可变区编码基因扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.11‑18所示，其中SEQ ID No.11‑14所示的引物用于第一轮扩增，SEQ ID No.15‑19所示的引物用于第二轮扩增；(4)用于轻链κ链可变区编码基因扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.20‑25所示，其中SEQ ID No.20‑22所示的引物用于第一轮扩增，SEQ ID No.23‑25所示的引物用于第二轮扩增；(5)用于猪抗体IgG1重链恒定区编码基因扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.26以及29所示；(6)用于猪抗体λ轻链恒定区编码基因扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.27以及29所示；(7)用于猪抗体κ轻链恒定区编码基因扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.28以及29所示；(8)用于CMV启动子片段扩增的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.30以及31所示；(9)用于扩增抗体全长的引物，所述的引物的序列分别如SEQ ID No.30以及29所示。