[发明专利]一种酶法不对称还原柠檬醛提高(R)-香茅醛光学纯度的方法

摘要

本发明公开了一种酶法不对称还原柠檬醛提高(R)‑香茅醛光学纯度的方法，即氨基酸催化的柠檬醛顺反异构反应与酿酒酵母烯醇还原酶OYE1催化的柠檬醛不对称氢化反应相偶联，提高柠檬醛氢化产物(R)‑香茅醛光学纯度的方法。所述酿酒酵母烯醇还原酶OYE1催化柠檬醛顺反异构体不对称氢化合成(R)‑香茅醛时，其(R)‑香茅醛源自反式柠檬醛，而(S)‑香茅醛源自于顺式柠檬醛，并且对反式柠檬醛的催化速率要远高于顺式柠檬醛。通过偶联氨基酸催化的柠檬醛顺反异构反应，将部分顺式柠檬醛转化为反式柠檬醛，显著地提高了产物(R)‑香茅醛的e.e.值；在10mL催化体系中，添加100mg/mL的甘氨酸，50mM柠檬醛经4h的催化反应后，(R)‑香茅醛的e.e.值达65.4％，与不偶联顺反异构化反应时(R)‑香茅醛的e.e.值(16.7％)相比，提高了48.7％。

主权项

1.一种酶法不对称还原柠檬醛提高(R)‑香茅醛光学纯度的方法，其特征在于所述方法为：以含酿酒酵母烯醇还原酶OYE1编码基因的工程菌发酵培养获得的湿菌体经超声破碎、分离纯化获得的纯酶为催化剂，以含博伊丁假丝酵母甲酸脱氢酶FDHCB编码基因的工程菌发酵培养获得的湿菌体经超声破碎、分离纯化获得的纯酶为偶联酶，以柠檬醛为底物，以仲辛醇为溶剂，以甲酸钠为辅底物，以NAD⁺为辅酶，添加氨基酸，以pH 6.0～9.5的缓冲液为反应介质构成转化体系，在30℃、200rpm条件下进行转化反应，反应完全后，获得(R)‑香茅醛；所述酿酒酵母烯醇还原酶OYE1编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示，所述博伊丁假丝酵母甲酸脱氢酶FDHCB编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示；所述氨基酸为下列之一：D‑蛋氨酸、L‑蛋氨酸、D/L‑缬氨酸、甘氨酸、L‑丝氨酸、L‑脯氨酸、L‑苏氨酸、L‑谷氨酰胺。