[发明专利]基于双环发夹探针以及酶介导的级联扩增策略检测博来霉素的方法有效
| 申请号： | 201610438020.6 | 申请日： | 2016-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN105950757B | 公开（公告）日： | 2019-11-22 |
| 发明（设计）人： | 王磊;姜玮;王慧娟 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 37221 济南圣达知识产权代理有限公司 | 代理人： | 张勇<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 250061 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于双环发夹探针以及酶介导的级联扩增策略检测博来霉素的试剂盒及其检测方法。通过双环发夹探针能够有效沉默触发序列，抑制非特异性杂交进而降低检测方法的背景信号；酶介导的级联扩增反应能够实现对检测信号的多重放大，从而提高检测方法的灵敏度，实现了对博来霉素的高灵敏检测，线性范围40pM‑10nM，检测限为35pM。灵敏度较之前建立的免标记荧光检测方法提高了近两个数量级，能够满足临床样品检测的需求。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 发夹 探针 以及 酶介导 级联 扩增 策略 检测 霉素 方法 | ||
【主权项】：
1.一种基于双环发夹探针以及酶介导的级联扩增策略检测博来霉素的试剂盒，其特征在于，包含：双环发夹探针，所述双环发夹探针用于和博来霉素特异性识别，并释放DNA触发序列；/n模板链HP1，所述模板链HP1的粘性末端能够与所述DNA触发序列结合，在聚合酶的作用下发生链延伸，形成一个切刻内切酶的识别位点，并在切刻酶和聚合酶的作用下，进行链置换反应，用以实现第一步扩增，产生DNA产物I；模板链HP1的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列；/n模板链HP2，所述模板链HP2能够与DNA产物I结合，发生聚合、切刻以及链置换反应，扩增产物与DNA产物I具有相同的碱基序列，扩增产物作为新的引物链与模板链HP2结合，触发新的聚合、切刻以及链置换反应，用以实现指数增长；模板链HP2的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；/n模板链HP3，所述模板链HP3的粘性末端能够与DNA产物I结合，发生聚合、切刻以及链置换的反应，最终产生大量的G-四链体序列，用以实现第三步扩增反应；模板链HP3的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；/n所述双环发夹探针的序列为TCC TTC CCT CTC AAA ACC TCG CAC CAA AAG GTG CGAGGA AGA AGAGAG GGA AGG A。/n
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