[发明专利]一种通过混培法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法

摘要

本发明公开了本发明的一种通过混培法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，包括如下步骤：步骤一，材料准备：无菌苗茎段截成0.8‑3cm长，每段至少保留一个叶腋；步骤二，预培养：在培养基MS+0.5mg/L 6‑BA中预培养0‑3d；步骤三，秋水仙素光照培养：预培养后的茎段转入分别附加有0‑200mg/L秋水仙素的MS+0.5mg/L 6‑BA+培养基中；步骤四，不附加秋水仙素培养：步骤三，上述培养进行7d后，转未附加秋水仙素的MS+0.5mg/L 6‑BA培养基中继续培养；步骤五，变异芽的同质化处理：步骤四培养40d后，选培养得到的变异明显的芽苗，在培养基MS+0.15mg/L NAA+0.5mg/L 6‑BA中，间隔40d反复培养5次。本发明的诱导方法,获得了四倍体无籽刺梨新种质，可增加无籽刺梨果实营养成分如Vc、VE和SOD等，同时使其果径和可食用部分增多。 1

主权项

1.一种通过混培法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，其特征在于，包括如下步

骤：

步骤一，材料准备：将无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成0 .8‑3cm长，每段至少保留一个叶腋；

步骤二，预培养：在培养基MS+0 .5mg/L 6‑BA中预培养2‑3d；

步骤三，秋水仙素光照培养：预培养后的茎段转入分别附加有100mg/L秋水仙素的

MS+0 .5mg/L 6‑BA培养基中，茎段浸没于培养基，使腋芽与培养基充分接触；

步骤四，不附加秋水仙素培养：步骤三进行7d后，转未附加秋水仙素的MS+0 .5mg/L 6‑BA培养基中继续培养；

步骤五，变异芽的同质化处理：步骤四培养40d后，选培养得到的变异明显的芽苗，在培养基MS+ 0 .15mg/L NAA+ 0 .5mg/L 6‑BA中，间隔40d反复培养5次；

将同质化处理后的变异苗进行倍性鉴定：当同质化处理的芽长至 2‑3cm时，将变异明显的无籽刺梨芽苗转入1/2MS +0 .1mg/L 6‑BA+0 .2mg/L IBA+0 .3g/L活性炭的培养基中生根，待根长1cm时，截取根尖材料，利用常规制片法进行染色体计数，确定其倍性。

2.根据权利要求1所述的一种通过混培法诱导无籽刺梨四倍体产生的方法，其特征在于，所述步骤一中将无菌苗茎段去除叶片和顶端，截成1cm长，每段至少保留一个叶腋。