[发明专利]一种从红豆杉药材中提取基因组DNA的方法

摘要

本发明公开了一种从红豆杉药材中提取基因组DNA的方法，是对植物基因组DNA提取试剂盒进行改良，在原试剂盒方法基础上加入苯酚‑氯仿‑异戊醇(25∶24∶1)抽提2次，以较好的除去蛋白质，并改为使用‑20℃预冷的DNA沉淀剂，以达到沉淀DNA的较好效果。使用改进后试剂盒从红豆杉药材中提取DNA扩增ITS2序列100%成功。本发明方法适合于从加工成药材饮片或粉末的红豆杉中获得基因组DNA用于后续常规分子生物学操作，为利用DNA生物学鉴定技术实现中药鉴别提供基础。

主权项

一种从红豆杉药材中提取基因组DNA的方法，所述方法按照以下步骤进行：1) 以65℃预热的、含有0.1wt%巯基乙醇的GP1缓冲液对红豆杉药材粉末进行处理；2) 以体积比为苯酚∶氯仿∶异戊醇=25∶24∶1的提取液对上述处理过的红豆杉药材进行提取，分离得到第一上清液；3) 向所述第一上清液中加入体积比为苯酚∶氯仿=25∶24的提取液进行提取，分离得到第二上清液；4) 在所述第二上清液中加入氯仿，分离得到第三上清液；5) 在所述第三上清液中加入缓冲液GP2，混匀，转入吸附柱CB3中，‑20℃冰箱中放置5min，取出离心，除去废液；6) 依次用预冷的漂洗液GD和预冷的漂洗液PW清洗吸附柱CB3，晾干吸附柱CB3中残余的漂洗液；7) 用洗脱缓冲液TE将基因组DNA从吸附柱CB3上洗脱下来，室温放置5min，离心收集溶液得到所述红豆杉药材的基因组DNA。