[发明专利]2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法

摘要

本发明公开了一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，其首先将壳寡糖标准品(壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖、壳六糖)及壳寡糖样品配成适宜浓度，注入高效液相色谱仪，进行高效液相色谱分析；然后记录壳寡糖标准品的出峰保留时间和峰面积以及壳寡糖样品中各峰的保留时间和峰面积，通过与标准物质的出峰保留时间进行比对，确定样品中各峰对应的2～6个聚合度壳寡糖；最后通过标准物质的浓度与峰面积的比值与样品中2～6个聚合度壳寡糖的峰面积，计算出样品中2～6个聚合度壳寡糖的浓度，通过与样品配制浓度的比值计算2～6个聚合度壳寡糖的总含量。本发明填补了行业内壳寡糖含量检测方法的空白。

主权项

一种2～6个聚合度壳寡糖总含量的检测方法，其特征在于，依次包括以下步骤：a配置壳寡糖标准溶液及样品溶液，将壳寡糖标准物质壳二糖、壳三糖、壳四糖、壳五糖和壳六糖分别配制成2％、2％、4％、8％、16％浓度的标准溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；将壳寡糖样品配制成30％浓度的样品溶液，经0.22μm微孔滤膜过滤，4℃冷藏，备用；b准备流动相，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，将乙腈和水分别经0.45μm的有机滤膜和无机滤膜过滤，按比例混合均匀，超声脱气30min，备用；c将壳寡糖标准溶液和样品溶液依次注入高效液相色谱仪中进行分离检测，色谱柱型号为Shodex Asahipak NH2P‑50 4E，流动相为乙腈：水＝73:27(v/v)，流动相流速1mL/min，色谱柱柱温30℃；d记录各聚合度壳寡糖标准物质的出峰保留时间和峰面积，样品溶液经高效液相色谱检测后，出峰保留时间与标准物质的出峰保留时间进行归属，记录峰面积，通过标准物质溶液的浓度与峰面积的比值和样品中2～6个聚合度壳寡糖的浓度与峰面积的比值相等的关系计算出2～6个聚合度的壳寡糖的浓度，进而计算出的2～6个聚合度的壳寡糖的浓度与配制样品的浓度的比值即为各个聚合度壳寡糖的含量，将各个聚合度壳寡糖的含量相加之和即为样品中2～6个聚合度壳寡糖的总含量。