[发明专利]人WIPI2-shRNA慢病毒载体、构建方法与应用在审
| 申请号： | 201610457343.X | 申请日： | 2016-06-22 |
| 公开（公告）号： | CN105925581A | 公开（公告）日： | 2016-09-07 |
| 发明（设计）人： | 袁献温;丁义涛;孙喜太;施晓雷 | 申请（专利权）人： | 南京大学医学院附属鼓楼医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/66;C12N7/01;A61K48/00;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京天平专利商标代理有限公司 11239 | 代理人： | 裴素艳 |
| 地址： | 210000 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明属于慢病毒载体制备领域，具体涉及一种人WIPI2‑shRNA慢病毒载体、构建方法与应用，合成针对RNA干扰靶点序列的DNA oligo的正链和反链；所述的正链和反链退火形成带粘性末端的双链DNA；通过酶切使慢病毒载体线性化，使线性化载体与步骤（1）得到的双链DNA连接；将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，对得到的阳性克隆进行PCR鉴定；质粒抽提，用于下一步病毒包装。本发明构建的人WIPI2‑shRNA慢病毒载体，将载体质粒转染后得到包装并浓缩的病毒，病毒再侵染目的细胞，实现了WIPI2基因干扰，降低WIPI2基因的表达，降低被病毒侵袭的细胞生长速率，提高被病毒侵袭的细胞凋亡率。 | ||
| 搜索关键词： | wipi2 shrna 病毒 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
WIPI2基因的shRNA干扰序列，包括DNA oligo的正链和反链，正链序列为5‘‑CCGGGATACG GAAGATGTGTGCATTCTCGAGAATGCACACATCTTCCGTATCTTTTTG‑3’，反链序列为5’‑AATTCAAAAAGATACGGAAGATGTGTGCATTCTCGAGAATGCACACATCTTCCGTATC‑3’；所述的正链和反链退火形成带粘性末端的双链DNA。
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