[发明专利]一种采用茶皂素强化培养生物破乳菌的方法

摘要

本发明属于工业微生物技术领域，涉及一种采用生物表面活性剂‑茶皂素强化培养生物破乳菌的方法。该方法主要包括以下步骤：发酵初始添加一定浓度范围的茶皂素；发酵结束后评价生物量及其破乳效能；优选能够同时显著实现破乳菌促产提效的茶皂素浓度。本发明中所采用的茶皂素具有高表面活性、生态友好性、低毒、价廉易得等特性，在较低的投加量下即可对破乳菌的生物量和破乳性能起到显著的促进作用，同时可降低破乳剂的合成成本，为破乳剂生产提供了一种简单有效的强化策略，从而为解决破乳剂应用中低产量、高成本这一瓶颈问题奠定基础。

主权项

一种采用茶皂素强化培养生物破乳菌的方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）制备破乳菌种子液：将破乳菌菌种在营养琼脂平板上活化后接种至100mL肉汤培养基富集培养72 h，再将10mL富集液接入以4mL石蜡为碳源的100 mL改良矿物盐培养基中培养7d，得到破乳菌种子液；所述肉汤培养基为牛肉膏0.5g，鱼粉蛋白胨1 g，NaCl0.5 g，pH =7.0；（2）制备发酵培养基：在含有4mL菜籽油的100mL改良矿物盐培养基中，添加0.01‑0.05 g的茶皂素，得到发酵培养基；（3）在步骤（2）所得的发酵培养基中接入10mL步骤（1）得到的破乳菌种子液，30℃、130 rpm下培养7 d，得到菌株的全发酵培养液；（4）培养结束后，采用重量法来评价破乳菌生物量的促产效果；将菌株的全发酵培养液在12000rpm，4℃下离心10 min；弃去水相和残余油相，所得的细胞经正己烷反复洗涤至菌表无油吸附，之后‑50℃下冷冻干燥24 h得到菌体干粉，称重；（5）采用模型乳状液破乳的瓶试法和Turbiscan Lab分析法来评价破乳菌破乳效能的促进效果，所述评价破乳菌破乳效能通过测菌体的破乳率、破乳速率和脱水质量得到；模型乳状液破乳的瓶试法如下：用煤油和水配制油包水型（W/O）模型乳状液，在250 mL高脚烧杯中，加入80 mL溶有1.526 g Span80和0.074 g Tween80的煤油溶液，然后加入120 mL蒸馏水，用高速搅拌乳化机10000 rpm下搅拌3.5 min；模型乳状液空白的24 h破乳率低于10%；乳状液的破乳率根据以下公式计算得到；。