[发明专利]转基因玉米次生代谢物的HPLC-MS/MS检测方法

摘要

本发明公开了一种转基因玉米次生代谢物的HPLC‑MS/MS检测方法，属于玉米次生代谢物的液质联用检测领域。本发明转基因玉米次生代谢物的HPLC‑MS/MS检测方法，包括以下步骤：(1)提取待测玉米种子中的次生代谢物，得到粗提液；(2)调节粗提液pH，然后上固相萃取柱进行净化，收集洗脱液；(3)采用HPLC‑MS/MS进行定性、定量测定。本发明通过对玉米样品中酚类代谢物的提取条件、固相萃取条件、液相条件以及质谱条件等的优化，建立的转基因玉米次生代谢物的HPLC‑MS/MS检测方法，灵敏度良好，有较好的重现性和稳定性，不存在基质效应，能够用于实际转基因玉米与非转基因玉米样品中酚类代谢物的检测和分析。

主权项

1.一种转基因玉米次生代谢物的HPLC‑MS/MS检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测玉米种子中的次生代谢物，得到粗提液；(2)调节粗提液pH，然后上固相萃取柱进行净化，收集洗脱液；(3)采用HPLC‑MS/MS进行定性、定量测定；其中，步骤(1)所述提取待测玉米种子中的次生代谢物包括：将待测玉米种子粉碎，加入提取溶剂，进行超声处理，收集上清液；所述提取溶剂为体积分数70％的甲醇；按照g/ml计，待测玉米种子与提取溶剂的料液比为1：20；所述超声时间为20min，超声功率为600W；步骤(3)所述HPLC‑MS/MS的液相条件包括：色谱柱为Agilent ZORBAX SB‑Aq色谱柱；柱温为25℃；流速为0.2ml/min；进样体积为1μL；流动相A为体积分数0.002％甲酸‑水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱；所述梯度洗脱的步骤包括：按照体积分数计，0min，0％B；1min，10％B；25min，20％B；33min，30％B；34min，40％B；38min，40％B；39min，70％B；41min，70％B；43min，0％B；步骤(3)所述HPLC‑MS/MS的质谱条件包括：离子源为电喷雾电离源，负离子扫描模式，雾化气为纯度99.999％氮气，碰撞气为纯度99.999％氮气，雾化气压力为40psi，干燥气温度为350℃，干燥气流量为10L/min，毛细管电压为3500V，检测模式为多反应监测模式；所述次生代谢物包括：香豆酸、没食子酸、香草酸、芦丁、苯甲酸、儿茶素、金丝桃苷、丁香酸、对香豆酸、对羟基苯甲酸、芥子酸、表儿茶素、龙胆酸、反式阿魏酸、咖啡酸、原儿茶酸、(‑)‑倍儿茶酸、高原儿茶酸、高香草酸、芹菜素、肉桂酸、香橙素、木犀草素、槲皮素、圣草酚、根皮素、橙皮素、柚皮素、异鼠李素、香叶木素或金雀异黄酮中的任意一种或多种；步骤(2)调节粗提液pH为3；用甲酸调节粗提液pH；步骤(2)所述固相萃取柱为Waters Oasis HLB柱；步骤(2)所述上固相萃取柱进行净化中，淋洗液为水，洗脱液为甲醇。