[发明专利]辣椒高效遗传转化及植株再生的方法

摘要

本发明公开了一种辣椒高效遗传转化及植株再生的方法，属于植物细胞工程技术领域，具体涉及一种辣椒Flamingo bill外植体介导的遗传转化及植株再生的方法，本发明通过改良培养基、侵染方式、外植体切割方式、延迟筛选和改进生根方式，在农杆菌的介导下，转化Flamingo bill外植体，经Flamingo bill外植体伤口处愈伤组织的诱导、分化和植株再生等途径，获得可持续生长的遗传转化再生植株，并有效提高辣椒的遗传转化率。

主权项

辣椒高效遗传转化及植株再生的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）载体构建：设计目标位点引物，并通过PCR扩增获得目标序列，将获得序列进行连接及筛选，并通过测序分析，获得最终正确的表达载体；（2）转化农杆菌及扩繁备用：利用表达载体转化农杆菌，并扩繁备用；（3）制备Flamingo bill外植体并进行预培养；（4）侵染转化及共培养：取农杆菌于平皿中，把MS液体培养基进行稀释，并加入乙酰丁香酮后与平皿中的农杆菌混合，得到侵染液，取出预培养好的Flamingo bill外植体放入侵染液中侵染，且所述侵染液只没过外植体子叶及伤口部分，侵染20～30min，侵染完成后，将Flamingo bill外植体稍加晾干水分即将其转至共培养基，所述共培养基为无菌的液体MS基本培养基，Flamingo bill外植体在黑暗条件下共培养3～4天；（5）愈伤诱导、新茎尖形成及伸长：共培养结束后洗菌，然后将Flamingo bill外植体转至MS固体培养基中，且只让Flamingo bill外植体根系接触培养基，培养14～20天，新生植株便会从Flamingo bill外植体伤口长出并伸长；（6）新生植株的切割及转移：当Flamingo bill外植体上的新生植株伸长至1.5～2.5cm时，将新生植株从其基部切割下，切割新生植株时连同切下一部分愈伤组织；（7）生根及筛选：新生植株的生根采用生根培养法或嫁接法，其中，所述生根培养法即在基本MS固体培养基中添加NAA，并且添加Basta作为筛选物，调节培养基的PH后灭菌，即得生根培养基，将带愈伤组织的新生植株转移至生根培养基中，培养12～16天并筛选即可获得完整的再生植株。