[发明专利]一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法，主要步骤包括：采集原生境下成熟种子，自然干燥后达到种子安全含水量的同批次种子用于提取DNA；将种子置于研钵中迅速研磨成粉末加入提取液，并置于水浴锅中浸提，离心；取上清液加入氯仿‑异戊醇，离心；取上清液再次加入氯仿‑异戊醇，离心；取上清液加入预冷的异丙醇，沉淀，离心得到沉淀物；弃上清液，加入乙醇冲洗沉淀物，倒掉上清液，自然风干，加入双蒸水将沉淀物完全溶解，即得到DNA提取原液。本发明的新疆大蒜野生近缘种取材时达到了准确识别，工作安全且效率高。DNA提取操作过程成本低、迅速，有效降低含硫化合物及其他成分的干扰，从而获得高质量的种子基因组DNA。

主权项

一种新疆大蒜野生近缘种DNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取原生境下的成熟的种子0.5‑1g，烘干至恒重，计算种子含水量，达到种子安全含水量的同批次干种子用于提取DNA。（2）将种子置于研钵中迅速研磨成粉末，转入离心管中加入65℃预热的SDS提取液700μL 与20μL β‑羟基乙醇混匀；所述SDS提取液是按下述方法制得：①58.4g NaCl加双蒸水制成200mL溶液即得5M NaCl；②37.22g EDTA加双蒸水至200mL即得0.5M EDTA；③12.11g Tris ，4.2mL HCl加双蒸水至100mL即得1M Tris‑HCl；④SDS提取液：SDS 2g，1M Tris 10mL，0.5M EDTA 4mL，5M NaCl 28mL，PVP 1g，β‑羟基乙醇2mL，最后加双蒸水至100mL为SDS提取液。（3）将离心管置于65℃水浴锅中浸提1.5h，其间缓慢混匀10次至提取液与粉末完全融合，取出离心管，擦干离心管外壁水珠，8000r/min离心5min。（4）取上清液600μL 至离心管中，加入600μL 氯仿‑异戊醇，8000r/min离心20min。（5）取上清液600μL 至离心管中，再次加入600μL 氯仿‑异戊醇，8000r/min离心20min。（6）取上清液500μL 至离心管中，加入‑20℃预冷的异丙醇200μL ，‑20℃沉淀30min，8000r/min离心5min得到沉淀物。（7）弃上清液，加入‑20℃预冷的70％乙醇500μL 冲洗沉淀物2遍，缓慢倒掉乙醇，自然风干40min，然后加入30μL 双蒸水将沉淀物完全溶解，即得到DNA提取原液，在‑20℃环境中保存。