[发明专利]一种低酚类含量植物培养基的快速制备方法

摘要

本发明公开了一种低酚类含量植物培养基的快速制备方法，以液体二氧化氯作为消毒剂在室温下实现对低酚类含量植物培养基营养成分和激素表面微生物的彻底灭活、消毒，快速获得无菌培养基。所述的低酚类含量植物包括半夏、白芨、瓜蒌、水稻、酸浆、烟草等。本发明可缩短培养基配制时间、大幅降低能耗费用、对培养容器材质无特殊需求，培养基容器中消毒剂二氧化氯的消毒作用可持续3周左右，消毒时间由传统高温高压灭菌的20～30分钟延长至约20天，适用于低酚类含量植物的组织培养尤其是大规模快速繁殖产业。 1

主权项

1.一种低酚类含量植物培养基的快速制备方法，其特征在于：以液体二氧化氯作为消毒剂在室温下实现对低酚类含量植物培养基营养成分和激素表面微生物的彻底灭活、消毒，快速获得无菌培养基；

所述的低酚类含量植物是半夏、白芨、瓜蒌；

包括如下步骤：

（1）制备二氧化氯溶液：称取1.5 g亚氯酸钠于棕色瓶中，加入50 mL去离子水，待其完全溶解后，加入5mL食品级盐酸，反应10 分钟后，再加入450 mL去离子水，混匀即获得1000 mg/L二氧化氯水溶液；使用前根据需要将其稀释10倍、25倍、50倍、75倍、100倍、200倍、500倍、1000倍至所需浓度；

（2）称取适量植物MS培养基成分及激素置于步骤（1）所制备的1～100 mg/L二氧化氯水溶液，加入1.0 mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤和0.5 mg/L 吲哚‑3‑乙酸，以每分钟100转的转速于磁力搅拌器上搅拌消毒20分钟，同时加热10分钟至培养基温度为50～60℃；

（3）将凝固剂琼脂或植物凝胶于微波炉或电炉加热至完全溶解清澈；

（4）将步骤（2）的培养基成分与溶解的凝固剂混匀，调节pH至5.8～6.0，用培养基分装容器分装冷却后即可使用。

2.如权利要求1所述的低酚类含量植物培养基的快速制备方法，其特征在于：取室外种植半夏叶柄，自来水冲洗1小时后于超净工作台内用10 mg/L二氧化氯消毒20 分钟，吸干水分后剪成1 cm长，插入权利要求1配制的培养基；在25±1℃条件下培养，15天后成功诱导离体块茎，诱导率为100%；在超净台内将离体块茎，接种至新配制的二氧化氯消毒的含有1.0 mg/L 6‑苄氨基腺嘌呤和0.5 mg/L 吲哚‑3‑乙酸的MS培养基，25±1℃条件下培养10天后即长出嫩芽，出芽率为100%；将嫩芽转至新配制的二氧化氯消毒的含有0.5 mg/L 萘乙酸的MS培养基，25±1℃条件下培养10天后即可生根，生根率为100%。

3.如权利要求1所述的低酚类含量植物培养基的快速制备方法，其特征在于：取室外种植白芨幼苗，自来水冲洗1小时后于超净工作台内用10 mg/L二氧化氯消毒20 分钟，吸干水分后接种至权利要求1配制的培养基；在25±1℃条件下培养，15天后长出丛生芽，诱导率为100%；在超净台内将嫩芽转至新配制的二氧化氯消毒的含有0.5 mg/L萘乙酸的MS培养基，25±1℃条件下培养10天后即可生根，生根率为100%。

4.如权利要求1所述的低酚类含量植物培养基的快速制备方法，其特征在于：取室外种植瓜蒌幼茎，自来水冲洗1小时后于超净工作台内用10～25 mg/L二氧化氯消毒20 分钟，吸干水分后剪成1 cm长段，接入权利要求1配制的培养基；在25±1℃条件下培养，15天后成功诱导愈伤组织，诱导率为100%；在超净台内将愈伤组织接种至新配制的二氧化氯消毒的含有1.0 mg/L呋喃甲基腺嘌呤和0.5 mg/L 萘乙酸的MS培养基，25±1℃条件下培养15天后即长出嫩芽，出芽率为46%；将嫩芽转至新配制的二氧化氯消毒的含有0.5 mg/L 萘乙酸 的MS培养基，25±1℃条件下培养10天后即可生根，生根率为100%。