[发明专利]一种基于原位衍生测定多种神经递质的检测方法

摘要

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种基于原位衍生测定多种神经递质的检测方法。该检测方法首次以4’‑碳酰氯‑罗丹明为衍生试剂，使用超声辅助‑原位衍生‑分散液液微萃取技术对氨基酸类和单胺类神经递质进行衍生化，并利用多反应监测模式的超高效液相色谱三重四极杆串联质谱进行定性定量检测。采用三种内标物（异丙肾上腺素，5‑羟吲哚‑2‑羧酸，正亮氨酸）用于三类化学结构的神经递质线性方程建立。通过内标法定量，准确测定神经递质的存在。本发明具有简单、快速、灵敏度高、选择性好，且回收率结果良好等优势，能快速、准确测定神经递质。

主权项

1.一种基于原位衍生测定多种神经递质的检测方法，其特征在于：所述的神经递质与衍生试剂4’-碳酰氯-罗丹明发生超声辅助-原位衍生反应，经超声辅助-分散液液微萃取富集纯化，得到的衍生化产物经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；具体包括以下步骤：a. 超声辅助-原位衍生-分散液液微萃取：取20-50 µL神经递质标准品混合溶液或待测样品，30 µL内标物溶液、800-1500 µL pH 8.0-10.0的 NaHCO3-Na2CO3缓冲溶液，加入离心管中，注入80-200 µL萃取剂和200-300 µL 4’-碳酰氯-罗丹明分散剂溶液，混合均匀后放入超声波振荡器中进行超声辅助-原位衍生-分散液液微萃取，反应结束后高速离心，吸取下层有机相并用乙腈定容到200 µL，得氨基酸类和单胺类神经递质衍生化产物溶液；所述内标物溶液是由10 µL浓度为1×10-5 mol/L异丙肾上腺素的乙腈溶液，10 µL浓度为1×10-5 mol/L 5-羟吲哚-2-羧酸的乙腈溶液和10 µL浓度为1×10-5 mol/L正亮氨酸的乙腈溶液组成；所述的萃取剂为1-溴-3-甲基丁烷，溴代环己烷，1-溴代辛烷或溴苯；所述的分散剂为丙酮，乙腈，甲醇或乙醇；b. 将上述氨基酸类和单胺类神经递质衍生化产物溶液经滤膜过滤后，利用超高效液相色谱三重四极杆质谱系统进行定性定量分析检测；所述4’-碳酰氯-罗丹明采用以下方法制备而成：将0.922 g 4’-羧基-罗丹明加入30mL氯化亚砜，滴入0.1 mL N,N-二甲基甲酰胺，磁力搅拌，升温至50～80℃，反应5～6 h，减压蒸除氯化亚砜，冷却至室温，得紫色固体，用乙醚重结晶，得紫色针状晶体即为4’-碳酰氯-罗丹明。