[发明专利]一种发酵法提取鱿鱼眼中透明质酸的方法

摘要

本发明公开了一种发酵法提取鱿鱼眼中透明质酸的方法，属于透明质酸领域。本发明先活化兽疫链球菌得菌液，再从鱿鱼眼加入兽疫链球菌液进行发酵培养得发酵液，对发酵液醇沉得粗透明质酸钠沉淀物，加入氯化钠溶液溶解后加入胰蛋白酶酶解得酶解液，将酶解液中的透明质酸钠络合反应得络合物，分离后解离，调节解离液pH后用超滤膜过滤，得透明质酸钠水溶液，通过阳离子交换树脂，得透明质酸水溶液，蒸发浓缩后真空干燥得透明质酸粉末，本发明利用微生物发酵法从鱿鱼眼制得透明质酸，不仅制备方法简单，成本低廉，而且提取率为45～60%、纯度为95.9～99.9％、生物活性高、保湿性强，在化妆品中具有广泛的应用。

主权项

一种发酵法提取鱿鱼眼中透明质酸的方法，其特征在于具体制备步骤为：将冷冻保存的兽疫链球菌ATCC39920接种到液体培养基中，在35～37℃温度下培养20～24h，培养后得活化的兽疫链球菌菌液，备用；所述的液体培养基为15～20g蛋白胨、12～16g葡萄糖、0.5～0.8g磷酸氢二钠、3～4g氯化钠，加水定容到1～2L，并调节pH值为7.0，调节后在120～125℃下高温灭菌处理10～20min；称取200～250g鱿鱼眼放入丙酮中浸泡1～2h后取出，在通风处放置5～7h后放入绞碎机中绞碎，将绞碎后的鱿鱼眼按质量比1:1和水混合，并研磨成糊状物，再将糊状物按质量比1:10与质量分数1～3%氯化钠溶液混合，放入锅中，在70～80℃下蒸煮15～20min，蒸煮后冷却至37～40℃，用质量分数10%氢氧化钠溶液调节pH值为7.5～8.0；向上述调节后pH的混合液中加入总质量1～2%酵母粉和混合液体积3～5%步骤（1）备用的兽疫链球菌菌液，保持在37～40℃温度下发酵培养18～20h，发酵培养后用纱布过滤，得发酵液；将上述发酵液用质量分数15%盐酸调节pH值为5.5～6.0，调节后加入发酵液总体积2～4倍质量分数90%乙醇溶液，机械搅拌20～30min后离心分离，得沉淀物，并用无水乙醇清洗2～3次，放入真空干燥箱中在50～60℃下干燥3～5h；将上述干燥后的固体按固液比1:10与质量分数5%氯化钠溶液混合，搅拌至固体溶解，溶解后用质量分数15%盐酸调节pH值为7.0，并向其中加入7000～8000U/g胰蛋白酶，在180～250W下超声处理15～20min，处理后在50～55℃下酶解2～3h后在100℃下灭菌5～10min，离心分离得上清液；将上述上清液放入浓缩罐中减压浓缩至原体积15～20%，向浓缩液中加入浓缩液体积2～3%浓度60～80g/L十六烷基三甲基溴化铵溶液，络合反应30～40min后离心分离得络合物，将络合物溶于质量分数15%氯化钠溶液中解离2～3h，得解离液，并调节pH值为3.0～4.0，调节后用截留分子量4×10⁴～9×10⁴的超滤膜过滤，得透明质酸钠水溶液，通过阳离子交换树脂，得透明质酸水溶液，蒸发浓缩后真空干燥得透明质酸粉末。